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第 一 章 實驗室器材之準備與應用
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作者: 詹益波;楊揚輝
詳細內容:
1.1. 一般注意事項
 
在實驗室內工作時應穿著乾淨的實驗衣,離室則更換之。
實驗前後無菌室內應點亮殺菌燈曝曬殺菌,如未設置殺菌燈,應以消毒藥液噴灑實驗台及其周圍。
工作中應戴口罩且不可隨便談話,亦不可吸煙及飲食。
注意清潔及整理,試藥、培養基、溶液類等均應明確記載其內容、名稱及日期,實驗結果亦應專冊詳細記錄。
恆溫器及冰箱應隨手關閉,實驗完畢之物品需經消毒或滅菌處理,不可棄置於恆溫及冰箱內。
儀器及器具之使用應遵守正確之使用方法,用後妥為收拾,俾不影響下次之用;尤其使用顯微鏡之油浸鏡頭後,不可忘記擦試乾淨。
有傳染危險之器具、培養基、污物等應依其性質分別以煮沸法、浸泡消毒法或高壓滅菌法等方法消毒,以防止病原污染及散播。
實驗完畢後切記以消毒藥水消毒手指及實驗台。
使用易燃性藥品及燃料,如黃磷、乙醚、酒精、瓦斯時,應小心謹慎。萬一著火,絕不可慌張,應沉著處理,乙醚、酒精類應使用泡沫劑、棉被或濕的毛巾滅火,忌用水而使火勢擴大。
下班前應再檢查瓦斯是否已緊閉,電源開關是否已切斷,水龍頭是否已栓緊。
實驗室內外應定期清掃,以消毒水消毒地板桌面等,以維持實驗安全。
實驗室應嚴格管制人員之進出,尤其嚴禁推銷員等無關人員出入。記錄彙整等文書工作應另闢休息室供用。
實驗室內物品需分門別類,儲放於固定地點,忌隨意搬移,尤不可搬出實驗室外。
實驗室內應有小型儲貨櫥,由專人管理,定期補貨,以利研究工作之進行。
執行重大傳染病之研究單位,應有隔離陰壓實驗室之設置,以杜絕病原污染鄰近環境之可能性 ( 請參考優良實驗規範 )。
   
1.2. 實驗室之設備
    一個健全的研究機關至少應有一般實驗室、無菌室、生化實驗室、病理實驗室及試驗動物舍等單位之設置。
1.2. 1. 一般實驗室
    通常將實驗台設於實驗室中央,台面以耐熱、耐酸及耐水之堅固材質製成。除應有水電、液化瓦斯、洗滌槽等設施外,並應用下列儀器及設備:光學顯微鏡 ( 含照相設備 )、倒立顯微鏡 ( 含照相設備 )、螢光顯微鏡 ( 含照相設備 )、低溫恆溫箱、二氧化碳恆溫箱、溫度控制恆溫箱、4℃ 冰箱、-80℃ 低溫冰櫃、-20℃ 冷凍櫃、離心機、煮沸消毒器、解剖器具、解剖台、血球計算器、計數器、PH 測定器、小型噴霧器,恆溫水槽、上皿天秤、微量天秤、試管架、計時器、真空幫浦、採材箱、細菌濾過器、迅速高壓滅菌器、乾熱滅菌器、蒸餾水製造器、電磁攪拌器、細胞培養用及細菌培養用及細菌培養用玻璃器具、藥品櫥、機械櫥、白金耳、白金線、鐵絲網籠、電動式吸管輔助器、液態氮筒、吸管洗滌器、12 爪連續稀釋器、8 爪連續分注器、無菌無塵操作台、可調式微量吸管等。
1.2. 2. 無菌室
    為實施細胞、病毒或細菌培養及危險材料之專用單位。實驗室與無菌室之間應設置隔間,在隔間內換穿無菌室專用之白衣、帽子、口罩、手套及拖鞋後進入無菌室。無菌室及隔間內均應裝設紫外線殺菌燈。天花板應用耐水材質,牆壁應用白色瓷磚或其他光潔建材,地面應用磨石子或其它光潔材料,並有適當傾斜,以便沖洗消毒。為防積存塵埃,牆壁應平坦光潔。日光燈及殺菌燈不可使用懸吊式,應嵌入天花板內。為因應夏季工作需要,冷氣機之設置有其必要性。
1.2. 3. 生化實驗室
    本室除應具備一般實驗室設備外,尚需增設下述儀器:煙櫃 ( 毒氣櫃 )、真空旋轉濃縮器、真空幫浦、原子吸光儀、高效能液相分析儀、分光光度儀、TLC 掃描儀、氣相層析儀、微量離心機、電泳槽、溫度循環機等。
1.2. 4. 病理實驗室
    病理實驗室需有解剖房之設置,房內需有不銹鋼解剖台、解剖用具、病材保存液及櫃等,實驗室內應增設高性能解析度顯微鏡 ( 含照相設備 )、冷凍切片機、組織包埋注蠟系統、迴轉式組織切片機、自動染色機、自動組織脫水包埋機等。
1.2. 5. 試驗動物舍
    應另設試驗動物舍而儘量避免將小動物飼養於實驗室內。地面應用磨石子或水泥,以便消毒沖洗,並應設置污水消毒處理槽。室內經常保持清潔,最好裝設空氣調節設備,亦應裝置排氣機。放置飼育箱用之鐵架可做成 3 段或 4 段,鐵架之 4 隻腳如能裝置小車輪則不論移動或清掃時均極方便。應裝設空氣過濾器,以防病原污染周遭環境,並保持空氣清新。
   
1.3. 常備消毒藥
1.3. 1. 石炭酸溶液
    將固體石炭酸連瓶浸置於恆溫水槽內溶解,通常與自來水配成 3~5% 使用。石炭酸原液有腐蝕作用,應留意不可觸及皮膚及衣物。常用於噴霧消毒、橡皮與玻璃製品及金屬器具之消毒以及紗布之浸漬,而不用於塑膠器具。消毒手指時,會使皮膚粗糙麻痺,故不適於手指之消毒。
1.3. 2. 6% 次氯酸鈉水溶液
    商品名為高力士,尚與自來水配成 500 倍水溶液使用。適用於吸管、玻璃器皿、動物屍體、動物舍、動物飼育箱、籠之消毒。
1.3. 3. 陽性肥皂液
    常用 0.1~1.0% 水溶液。販賣品有 10%、30% 及 50% 濃度者,應依使用說明書稀釋使用。無臭,故適用於手指、雞蛋、玻璃器具及金屬器具之消毒。商品名為 Antiseptol,Hyamine 等。
1.3. 4. 酒精
    以 70% 濃度之消毒力最強,純酒精之消毒力反而較弱。通常將脫脂棉切成小塊,放進有蓋標本瓶,做成酒精棉使用,用於手指之消毒及注射時之局部消毒等。
1.3. 5.碘酒
    裝入小瓶,以棉棒浸潤使用,或將脫脂棉做成小圓團放入小容器內,浸漬碘酒,以竹製鑷子捏夾使用之。用於皮膚、傷口、雞蛋等之消毒,消毒力甚強,但對於局部亦有傷害,故應以酒精棉拭取過剩之碘液。
1.3. 6.3% 雙氧水及 0.1% 過錳酸鉀水溶液,均適用於口內吸入危險材料時之漱口。
   
1.4. 器具洗滌及滅菌
1.4. 1. 玻璃器具之洗滌法
1. 肥皂水洗滌法:
  將肥皂粉溶解於溫水,把需洗滌之玻璃器具浸漬一夜,翌日使用毛刷,充分刷洗後以自來水沖洗清淨,再以蒸餾水沖洗,置乾燥架或鐵籠中自然乾燥。如需急用,可放入乾燥器內以低溫乾燥。
2. 重鉻酸鉀硫酸溶液洗滌法:
  新購玻璃器具,或以肥皂水刷洗不淨時,可使用重鉻酸鉀硫酸溶液浸漬一夜後取出,先以清水沖洗,再以刷子粘附肥皂粉及灰粉充分刷洗,最後以清水及蒸餾水充分沖洗 ( 浸漬重鉻酸鉀硫酸溶液者,應特別留意充分沖洗 )。操作時應使用厚質橡皮手套,尤應小心不可噴入眼睛。
  重鉻酸鉀硫酸溶液配製法:
       粗製重鉻酸鉀     300 gm
       20% 硫酸水溶液   3000 ml
  使用琺瑯質或陶質容器,先放入 20% 硫酸水溶液,然後緩慢加入粗製重鉻酸鉀,以玻璃棒攪拌,此時會發熱,俟冷卻後使用。
3. 載玻片及蓋玻片洗滌法:
  用過之載玻片以肥皂水煮沸除去載玻片之油脂,浸漬於重鉻酸鉀硫酸溶液內一夜,以自來水充分沖洗。若以面盆洗滌,應換水 5~6 次。洗滌後浸漬於 2% 鹽酸酒精內,用前放於濾紙上,以乾淨無油之紗布擦乾備用。
1.4. 2. 滅菌法
1. 乾熱滅菌法:
  燒瓶及試管在其口部塞入棉栓,燒皿、乳缽、吸管及量筒則以鋁鉑紙適當包裝,貼上滅菌標籤後放入乾熱滅菌器內,加熱 160℃ 滅菌 60~90 分鐘,滅菌完成後應俟冷卻後取出。如於高溫時開門,由於急速冷卻,會引起玻璃之爆裂以及紙與棉花之燃燒,應小心留意。
2. 蒸氣滅菌法:
  通常使用可沸 (Koch) 蒸氣釜,加入適量之水,放入滅菌物品,加蓋後加熱。為使蒸氣循環良好,不可同時放入太多物品。內部溫度到達 100℃ 後加熱 30~60 分鐘,滅菌完成應於尚熱時取出,拿掉玻璃紙或硫酸紙,使棉栓乾燥。有芽胞之細菌,須實施每天 100℃ 30 分鐘,連續 3 天之間歇滅菌。
3. 高壓滅菌法:
  醫院、研究所等機構通常採用大型電氣迅速高壓滅菌器,極為簡便。滅菌溫度 (121℃)、壓力 (1kg/cm2) 及時間 (15~30 分鐘 ) 設定後應注意排氣孔是否完全關閉,內部水量是否足夠,檢查無誤後,方可啟動機器。滅菌完了排氣時,不可過急,應使氣壓緩慢下降或使其自然降壓後開啟,否則內容會沸騰而碰觸栓蓋,甚至因壓力過大而被沖掉。
4. 濾過滅菌法:
  血清、組織培養用之 Trypsin 與培養液以及病毒乳劑等須除去細菌時應用本法。有 Berkefeld 型、chamberland 型、Seitz 型及 Millipore 型四種。Berkefeld 型濾過器是哇藻土製成者,依其孔之大小有 V(Vied),N(Normal)、W(wenig) 等三種。W可將所有細菌完全阻止,V 可讓腸內菌通過,N 則為中間型。Chamberland 型濾過器為 Kaolin 與硅砂混合經高熱處理製成者,有 L1、L2、L3…… 等種類。L1 只使濾液透明,L3 以下則可完全阻止細菌之通過。Seitz 型濾過器使用以石綿做成之圓板 ( 通常使用直徑為 3cm、6cm、14cm 者 )。濾過板有 K 與 EK 二種,EK 可完全除去細菌。
  Millipore 型濾過器之形態與使用法和 Seitz 型相同,但以 Membrane filter 代替濾板。孔徑大小有 0.22、0.3、0.45 及 0.65-5.0μ 等多種,可用於病毒大小之測定。濾過前須以鍚箔紙或玻璃紙包裝妥當,經高壓滅菌後使用,裝濾液之玻璃瓶可用乾熱滅菌之。通常使用真空幫浦,吸引成陰壓,使材料溶液通過濾過器,濾液再以 Thioglicolate 培養液查是否無菌。數量多時亦可使用空氣壓縮器以陽壓過濾。一般濾過均採較大口徑濾膜粗濾後,再行細濾,以免大顆粒物質阻塞濾孔,而使過濾效果減低。
   
1.5. 離心機之使用
    將需離心分離之液體放入離心管內,另取同形之離心管加水,以天平稱為等重,放入離心機內對稱之位置,設定離心時間與轉速後,蓋上蓋子,啟動機器,使迴轉速緩慢上升;轉速上升太快,往往導致離心管的破損。待自然停止後,取出離心管,以吸引幫浦油抽掉上清液或以吸管吸取上清液備用。
    離心機使用後應隨時擦拭機體內外,保持整潔並定期維護。設有低溫裝置者,應於使用後切斷電源,以免壓縮機持續運轉而燒壞,並打開機蓋,使水汽散失,以保持乾燥。
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