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應用細胞培養技術分離結核分枝桿菌
Development the method of isolation of mycobacteria in tissue culture
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作者: 林敬覆;楊喜金;黎南榮;蕭終融;吳義興;張惟茗;陳素貞;蘇杰夫
英文摘要: In order to develop a isolation method of mycobacteria by tissue cultures, the isolation strain of mycobacterium bovis-M.bovis YL strain was inoculated in the tissue cultures of swine alveolar macrophages (SAM),Marc-145 and OCC, respectively.The results revealed that the M. bovis-YL strain was found growth well in the above mention tissue cultures at 3 day after inoculation. The specimens collecting from the positive reaction cattle by PPD(Purified protein derivative) inoculating in slants(Lo
備註: 年份:西元 39 年
期別:第 35 期
詳細內容:

  由於以傳統之斜面培養基(Lowenstein-Jensen medium,L-J M)分離結核分枝桿菌至少需時5至14 週(1,6),為縮短其分離時間,以提升診斷品質及時效,而自行研發改良以組織培養分離本菌(2,3,4,5,7,8,9,10,11,12),以與斜面培養基分別分離本菌之結果分析比較,以供參考。今就所使用之方法、材料及結果等,分述於下。

材料與方法

  首將本所分離所得之牛型結核分枝桿菌(Mycobacterium bovis ,M.bovis)分離株(M.bovis-YL)分別 接種於初代豬肺臟大吞噬細胞(Swine alvoelar macrophage,SAM)及株化細胞 OCC Marc-145,並於接 種後後第 1 天起每天各取 3 Chamber slide 固定、抗酸菌染色、鏡檢至第 7 天。次將以 PPD  皮內注射測定,判定為陽性反應牛隻、鹿及羊之臟器淋巴組織,分別以  0.1  次氯酸納溶液清洗後,浸置於 4 1224 小時,取出後以無菌剪刀細剪後,加入適量(35mL)  Dubosbroth  後,以電動磨碎機( Grinder )磨碎後,加入 0.5N NaOH 處理 30 分鐘後,再加入6N HCl 處理 30 最後以 1N NaOH 加入中和處理 30 分鐘放入具有冷卻裝置之離心機 3,000rpm 離心 30 分鐘倒棄上清將其沉澱物分別接種培養於  Chamber slide 內之 SAM   Marc-145OCC 株化細胞和不含甘油之 L-J (w/o)M 及含 2Tween 80 L-J (t80)M 卵培地之 Slant 斜面培養基試管後,分別放置內含 5CO237之恆溫箱內培養,接種於上述組織培養如同上 述於接種後第 1 每天分別各取 3 Chamber slide 抗酸菌染鏡檢至第 7 在斜面 培養基培養方面則需 514 週菌落形成後再行釣菌固定抗酸菌染色後鏡檢  Slant  斜面培 養基分離與接種於組織培養者之分離結果進行比較,以供分析、評估時之資料。

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分離結核分枝桿菌 0000000460
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