(一)病名及病原

1.病名：傳染性支氣管炎 (Infectious Bronchitis)

2.病原：由冠狀病毒 (Coronaviru) 所引起。

(二)疾病簡介

 　　傳染性支氣管炎 (IB) 引起雞高度傳染性之急性呼吸器及泌尿生殖道疾病，本病目前有許多血清型，不同血清型之間不會有良好的交叉保護效果。 　　

本病在台灣於 1985 年由黃萬居最初報告病例，但直到 1964 年才由呂榮修等分離病毒，確認本病在台灣發生。目前台灣流行者為引起腎炎型病例較多，由每年十一月至翌年四月，在寒流來襲時為甚。  

(三)典型之臨床症狀及病理變化 　　

各年齡階層之雞隻皆有感受性，潛伏期只有 24-72 小時是本病特徵之一，又雞有急性呼吸道症狀如呼吸時的異常呼吸音、咳嗽、噴嚏、開口呼吸等及食慾不振、無精神、下痢。罹病率可達 100%，但無其他病原之混合感染或二次性感染則死亡率通常低於 5%。中雞被感染會引起呼吸道症狀及卵管之發育不全，又產蛋中之雞被感染後會引起產蛋率及蛋的品質下降，如卵殼異常蛋 ( 軟蛋、畸形蛋、薄殼蛋、矮小蛋、粗殼蛋等 )。有些毒株會引起小雞嚴重腎炎，輸尿管及腎小管內充滿尿酸鹽晶體而膨大、腎腫大，另外亦有水樣性下痢、脫水、精神萎糜及發生高死亡率。 　　

本病之肉眼病變包括在氣管、鼻道及鼻竇有漿液性，卡他性或乾酪樣滲出物，氣囊混濁或有黃色乾酪樣沕。在氣管下部或支氣管偶可見乾酪樣栓塞。在大支氣管周圍可能有小區域的肺炎。腎臟型病變可見腎腫大、蒼白、腎小管及輸尿管因連酸鹽沉積而擴張。產蛋雞腹腔內有水樣蛋黃物質，但此病變在其他引起產蛋下降的疾病亦可見到。 　　

本病之顯微病變有氣管黏膜水腫，上皮細胞纖毛脫落，細胞圓形化、脫落，在感染後 18 小時內便有異嗜球及淋巴球的輕微浸潤。上皮細胞之再生通常在感染後 48 小時開始，在感染 7 天後氣管黏膜固有層有大量淋巴細胞之浸潤與大量生發中心之形成而且上皮細胞增生的情形。在早期氣囊可能有水腫、上皮細胞脫落及一些纖維素滲出物，隨後有異嗜球增加，再繼以淋巴結節、纖維母細胞增生及立體上皮之再生。腎臟之病變則以間質性腎炎為主。在急性期時腎小管上皮細胞呈顆粒樣變性、空泡形成、腎小管上皮脫落及大量異嗜球浸潤，腎小管病變以髓質區最為明顯。腎小管上皮可見局部區域壞死及再生。恢復期，炎症細胞則以淋巴球及漿細胞為主。有些病例腎的一部份或全部在肉眼上可能呈嚴重的萎縮現象，此萎縮的腎組織病理學上常伴有腎小管結石及擴張等病變。  

(四)應採病材

 　　本病病原分離以採取氣管拭子為佳，方法是以無菌棉花擦拭病雞氣管黏液及肛門拭子後，直接放入 2-3ml 含抗生素抗菌劑之冰冷無菌的 trypose phos-phate broth(TPB ; pH7.0-7.2) 或 Eagle's MEM 內。其他組織如、腎、卵管及盲腸扁桃等亦以無菌採樣，置於無菌袋或無菌容器內。所有採取之拭子及組織樣本在送至病毒檢驗室的過程中應保持冰凍。  

(五)綜合診斷 　　

本病之診斷需基於病史，剖檢及顯微病變，血中抗體的上升，以螢光抗體法檢出病毒抗原。最後確診需作病毒分離及鑑定。 

1.病原分離及同定

 　　本病病毒分離通常使用雞胚、氣管器官培養 (organ cultrure) 及雞腎細胞培養。其中初代分離時以使用雞胚為佳，其方法是使用 8-10 日齡雞胚經由絨毛尿囊腔接種 0.2ml 病材。接種蛋每天檢查，如在接種後 3-7 天內死亡者認為是病毒特異性。在接種後第 3 天，將半數的接種蛋移出孵卵器放置在 4℃，18-24 小時後，以無菌採收絨毛尿囊液。餘下之蛋在接種後 7 天打開檢查雞胚有無本病典型病變，如矮小化、雞胚捲曲發育不良，或有尿酸鹽沉積於腎的中腎管。在雞胚致死性毒株所接種之雞胚常可見皮膚出血。有些病毒株在第一代接種時不會引起雞胚死亡或產生病變，因此所採病材至少要雞胚繼代 3 代才能認為是陰性。本病病毒在電子顯微鏡下檢查呈現冠狀病毒的特殊形態，中間有由核糖核酸及蛋白質所組成的核蕊，外圍含有脂質之蛋白外膜及突起呈輻射冠狀排列，一般 IBV 接種後 24 小時，在氣管的腺毛細胞及黏液細胞的細胞質小胞內會出現病毒顆粒，在細胞外也能見到。

2.血清學診斷 　　

血清學檢查方法中病毒中和 (V/N) 試驗及血球凝集抑制 (HI) 試驗可測定病毒血清型 ( 見附錄 1)，而螢光抗體法及瓊脂擴散法 (AGP 法 ) 則無法決定血清型。一般以酵素標示抗體法 (ELISA) 來檢查雞隻抗體較為方便，此方法可檢出所有血清型毒株但非血清型特異性。 　　市面上有 ELISA 診斷盒子及電腦轉推分析軟體可幫助 ELISA 法之實施。實施方法係以 96 孔微量平板及單一血清稀釋倍數的方法來評估雞隻的免疫狀況。急性發病期血清及恢復期血清 ( 最好是來自同一隻雞 ) 以 ELISA 檢查發現有 IBV 抗體之上升即表 IBV 有的感染。發病期血清採取後需保存-20℃，直到採集恢復期血清後一起測試以減少誤差。AGP法及ELISA抗原的製備及方法分述於附錄 2 及附錄 3。中和試驗可在雞胚或雞腎細胞上實施時，以含病慣 32~32OEID50 與含 10-20 單位抗體的血清作用。抗體之單位係以同源毒株測定，以能保護雞胚最高稀釋倍數為1單位。

(六)確診依據 　　

本病依病型 1. 呼吸器病型、2. 產蛋異常型及 3. 腎炎型等臨床症狀及病變予以診斷，最後確診須接種於 10~11 日齡雞胚尿膜腔內繼代分離，或以氣管器官培養法分離病毒。 　　

分離的病毒以中和試驗，血球凝集抑制試驗，AGP 法鑑定之，對於抗體檢查以 ELISA 或以中和試驗 (SN) 檢查。  

(七)參考文獻 

1.Alexander, D. J. and N. J. Chettle. Procedures for the hemagglutination and the hemagglutination-inhibition tests for avian infectious bronchitis virus. Avian Pathol. 6：9-17.1997.

2.Cowen, B. S., and S. B. Hitchner. Serotyping of avian infectious bronchitis viruses by the virus-neutralization test.Avian Dis.19：583-595.1975.

3.Gelb, J., Jr. and S. L. Killian. Serum antibody responses of chickens following sequential inoculations with different infectious bronchitis virus serotypes. Avian Dis.31：513-522.1987.

4.King, D. J., and D. Cavanaugh. Infectious bronchitis. In：Diseases of Poultry,9th ed. B. W. Calnek, H. J. Barnes, C. W. Beard, W. M. Reid,and H. W. Yoder,Jr.,eds.Iowa.In Press.

5.King, D. J., and S. R. Hopkins. Evaluation of th hemagglutination-inhibition test for measuring the response of chickens to avian infectious bronchitis virus vaccination Avian dis.27：100-112.1983.

6.King.D.J.,and S.R.Hopkins.Rapid serotyping of infectious bronchitis virus isolates with the hemagglutination-inhibition test.Avian Dis.28：727-733. 1984.

7.Thayer,S.G.,P.Villegas,and O.J.Fletcher. Comparison of two commercial enzyme-linked immunosorbent assays and conventional methods for avian serology. Avian Dis. 31120-124. 1987.

(八)附錄 

附錄 1. 　　

血球凝集抑制 (HI) 試驗之實施方法如下： 　　

病毒抗原以磷脂脢 C(phospholipase C) 處理製成 HA 抗原。4-8 單位的 HA 抗原加上 2 倍序列稀釋的血清 (1：2 至 1：1024 倍 ) 在室溫感作 1 小時，加入 0.5-1% 雞紅血球懸浮液，30-60 分鐘後判讀。 

附錄 2. 　　

IB 瓊脂擴散法 (AGP 反應 ) 　　

AGP 抗原之製備： 　　

使用抗原：感染雞胚的漿尿膜、尿囊腔液、雞腎感染細胞、氣管滲出物。 　　

漿尿膜抗原：製成乳劑為直接抗原或以乳劑濾液凍結乾燥法濃縮為抗原。 

 ELISA 實施方法 

1. 抗原固相化： 　　

陽性、陰性抗原以 pH9.6 碳酸緩衝液稀釋分裝 0.05m 於 96 孔 EIA 微量塑膠盤，於在 4℃ 一夜後以 0.05%Tween80 加生理鹽水洗 3 次，放在室溫 30 分鐘、乾燥、固相化。 

2. 前處理： 　　

加稀釋液 (1%BSA 加 PBS)0.1ml，在 37℃ 60 分鐘處理後，洗 3 次。 

3. 添加被檢血清： 　　

血清以稀釋液稀釋，陽性、陰性抗原的各孔分別加 0.05ml，在 37℃ 60 分鐘反應後，洗 3 次。 

4. 添加疫醏素標示抗體： 　　

以稀釋液稀釋的 Peroxidase 標示抗雞 IgG 兔血清加 0.05ml 在 37℃ 20 分鐘反應後，洗 3 次。 

5. 添加基質： 　　

加含 ABTS 基質 0.05ml，遮光、在室溫反應 30 分鐘。 

6. 加停止液： 　　

加停止液 (0.1N NaOH)0.05ml。 

7.測定 OD 值： 　　

各孔之吸光度調為 405nm 及 492nm2 波長。 

8. E 值之計算： 　　

陽性抗原的 OD 值與陰性抗原的 OD 值之差為 E 值。