以目視DNA晶片同時檢測,分型及區別豬瘟野外毒及疫苗毒
- 作者
- 潘居祥;顧有為;鐘明華;趙磐華;賴秀穗*
- 建立日期
- 98年03月13日
- 更新日期
- 98年03月13日
- 內容
應用反轉錄聚合酶鏈反應 (Reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR) 增幅後再進行核酸定序是目前檢測野外豬瘟並排除疫苗毒干擾實驗室診斷之主要方法。本論文為了同時檢測,分型及區別豬瘟野外毒及疫苗毒因而發展目視DNA 晶片檢測法。豬瘟病毒特異性引子及探針係依據病毒基因3端未轉譯區核酸序列而設計,採用生物素標識引子進行單步驟RT-PCR反應,隨後與固定在高分子塑膠晶片上的探針進行雜合反應 (Hybridization)。本方法可精確地將豬瘟病毒區分為三種主要基因型,並可同時區別野外毒及疫苗毒。傳統RT-PCR方法可檢測豬瘟野外毒之最低力價為10 TCID50 /mL,DNA晶片可檢測之最低病毒/mL,DNA晶片相較於RT-PCR方法敏感性高10倍。RT-PCR結力價為1 TCID50合DNA探針雜合技術可提高檢測敏感性,可快速鑑定臨床檢體中豬瘟病毒的基因型別,並區別野外毒及疫苗毒。
關鍵詞:豬瘟病毒、DNA 晶片、探針、反轉錄聚合酶鏈反應