應用反轉錄聚合酶鏈反應技術檢測Avian Pneumovirus之研究
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雞腫頭症候群(SHS)與火雞鼻氣管炎(TRT)為禽類呼吸道疾病,其病原為Avian Pneumovirus。台灣於1991年正式由感染腫頭症候群雞隻分離出腫頭症候群病毒。應用RT-PCR技術於Avian Pneumovirus,以瞭解台灣分離株與國外分離株之親疏與演化關係以及病毒在雞隻體內分佈情形。Avian Pneumovirus共有A、B、C、D四個sub-type,利用RT-PCR技術將台灣1991年SHSV分離株的F、G、M、N、P等gene之核酸增幅並定序,核酸序列進行基因庫搜尋比對分析,台灣分離株與匈牙利分離株Hungary/89 、 Hungary/ 97等sub-type B的病毒株具有極高的相似性( 99.1 %~ 99.8 ﹪),依據變異性最大的Attachment(G) protein核酸序列比對發現,台灣分離株與英國分離株相似性可達 99.1 ﹪,與法國分離株sub-type D的相似性為 46.8 ﹪。因此實驗結果顯示SHSV台灣1991分離株可歸類至sub-type B。臨床上檢測APV可採用高保留gene區域的N、M、P等特異性引子進行PT-PCR實驗,做快速疾病鑑別診斷,而在區分sub-type則可使用F、G兩組的引子進行型別區分。接種SHSV台灣分離株於無APV抗體之SPF雞隻,接種後採集檢體,使用特異性引子進行RT-PCR及Nested-PCR,增幅出病毒特異性片段545 bp及 183 bp,實驗結果發現SHSV能長期存在於雞隻體內,接種後8小時至接種後42天均能檢測出SHSV病毒核酸,其中以鼻竇、腦、喉頭、肺臟、淋巴器官等檢體經RT-PCR反應其所顯示的特異性核酸片段訊息最強,病毒分佈檢體於接種後8小時從呼吸道器官到7~9天全身性分佈,直到接種後第42天時尚可由胸腺、華氏囊、腸間淋巴(GALT)、盲腸扁桃等淋巴器官檢測出病毒核酸反應。顯示SHSV可以長時間潛伏感染(long-term persistence)。血清學檢查試驗雞隻血清,發現於接種SHSV台灣分離株後第 10 天,使用ELISA Kit能檢測出SHSV抗體陽性。接種後第 9 天開始雞隻產生中和抗體力價,且於接種57 天後可測得log25的中和抗體力價。