十四、豬瘟
- 內容
(一)病名及病原
1.病名:豬瘟
2.病原:豬瘟病毒屬 Flaviridae 科
(二)疾病簡介
豬瘟是一種高度傳染病,急性敗血症的病毒性疾病,主要特徵為全身出血。無免疫性各種豬齡的豬均有感受性,潛伏期為 5 至 10 天,在開始爆發豬瘟時,常為極急性感染,感染豬群中常有幾頭無任何症狀斃死。但一般多為急性型,感染保育豬 (8~12 週 ) 為最普通,感染豬隻有精神不振、厭食、倦伏、姿勢歪斜、喜躺下、經常堆擠在一起,皮毛粗糙。在症狀出現前有高熱 (40.5~42.5℃),早期便秘後下痢,末期在腹部皮膚有彌漫性充血及紫斑,在耳根、尾部及四肢特別顯著,神經症狀如肌肉發抖,抽搐及後肢麻痺亦為常見,病發後 7 至 15 天死亡,死亡率高。非典型豬瘟或稱慢性豬瘟也常在野外發現,這種病則潛伏期長,消瘦、生長遲緩、皮毛粗糙、頑固下痢、四肢及腹部呈現紫斑為主要症狀,感染豬隻常併發肺炎死亡。懷孕母豬感染會有木乃伊化,死產或流產的現象。
(三)應採病材
供病理學診斷用的病材包括腦,部份腸管及其它內臟器官如腎、肺、肝、脾、淋巴結及腎上腺等,須保存於 10﹪福馬林液。供病毒分離的病材包括血液、扁桃腺、淋巴結、脾及肺等組織,須用冷藏密封的容器運送到實驗室。
(四)綜合診斷
1.病原分離及同定:
(1)組織培養方法:將病材組織以細胞培養液做成 10 倍的乳劑,經以 3,000rpm 離心 30 分鐘後取上清液接種於 2 至 3 日齡的 PK-15 或 CPK 株單層細胞,在 37℃ 培養 2 至 3 天後,以冰冷的丙酮固定細胞 10 分鐘,再以豬瘟螢光抗體染色後,以螢光顯微鏡觀察。陽性者在細胞質內可見蘋果綠的螢光,細胞核則為暗黑色。感染細胞常成為分散的大聚落,本檢定方法常須設有陽性及陰性對照。
(2)螢光抗體冷凍切片後:採用扁桃腺、淋巴結、肺及脾組織等切成 1 至 1.5 公分的組織方塊,在冷凍切片機內急速冷凍後,再切成 6~9mμ 的組織切片,經附著於玻片後,再以冰冷丙酮固定 10 分鐘,經豬瘟螢光抗體染色後,以螢光顯微鏡觀察。陽性者在細胞質內可見蘋果綠的螢光。
(3)免疫酵素診斷法:上述二種方法所準備的感染細胞或組織切片,經固定後以豬瘟單源或多源抗體先與組織切片,或細胞在 37℃ 感作 30~60 分鐘後,再以酵素標示的第二抗體作用,後以受質使有豬瘟抗原存在的細胞呈色。
2.血清學診斷:
(1)END 法 (Exaltation of Newcatle Disease Virus Method):以病毒稀釋液 ( 不含血清 ),將待檢之豬血清 ( 先經 56℃30 分鐘非化 ),於 96 孔微量盤中以二倍法稀釋,後加等量之豬瘟毒液 (A76 病毒株,每孔含 200TCID50),在 37℃ 二氧化碳恆溫箱內感作一小時後,加入初代睪丸細胞 ( 每孔含 2×105 個細胞 ) 置 37℃ 二氧化碳恆溫箱內培養 4 天後,吸去培養液,再以含 2HA 的新城雞瘟病毒宮寺株攻毒,再置於恆溫箱培養三天後,有細胞病變者表示血清中無豬瘟抗體,反之則有。抗體力價之計算係以 Spear-Karbar 方法定之。本方法進行試驗時必須設立陽性及陰性血清對照。
(2)中和試驗螢光抗體法:將檢測的血清以病毒稀釋液二倍稀釋。再加等量的豬瘟病毒液 ( 可用強毒株如 ALD 或 A76 弱毒株,含 200TCID50 ),在 37℃ 感作一小時後,將各稀釋階段的病毒血清混合液接種在 PK-15 的單層細胞,培養 2 天後,以冰冷丙酮固定並以豬瘟螢光抗體液染色。抗體力價計算方法,係以出現螢光的最後稀釋倍數為被檢血清的豬瘟抗體倍數。
(3)免疫酵素法 (Enzyme-Linked Immunosorbeut Assay,ELISA):將純化的豬瘟病毒抗原附著於 96 孔微量盤,以 3﹪牛白蛋白或 Gelatin 將未吸咐豬瘟病毒抗原的地方覆蓋,將檢測的豬血清滴於孔內,在 37℃ 感作一小時後,再以酵素標示的抗豬球蛋白的血清作用一小時後,再以受質使呈色,並以酵素計算儀計算呈色的濃度,本法必須設立陽性及陰性對照血清。
3.病理學診斷:
(1)解剖病變檢查:極急性型豬瘟,一般無顯著病變,急性型則在黏膜及漿膜下層會有點狀出血;如腎臟包膜下、迴盲瓣周圍、淋巴皮質竇、膀胱及喉頭常有明顯的出血點。淋巴常出現週邊出血及腫大,脾臟邊緣有梗塞,肺也常發生充血。結腸之鈕扣狀潰瘍亦常見。較慢性型的豬瘟病例往往沒有上述的典型病變,偶可見腎臟皮質部少數的出血點,典型的脾臟梗塞則少見,在診斷時應與沙門氏桿菌所引起的出血病變區別。所以必須靠病毒分離或組織病理學做最後確診。
(2)組織病理學檢查:組織病理學主要檢查腦之非化膿性腦炎,可與細菌性引起之化膿性腦炎區別,及各臟器的出血點,特別是腎及淋巴。
(五)確診依據
1.病毒分離。
2.組織抗原檢測。