口蹄疫融合蛋白質之研發與應用
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口蹄疫 (Foot and mouth disease;FMD) 是對偶蹄動物威脅最大的病毒性疾病之一,本病由Piconaviridae aphthovirus所引起,常造成畜牧業者莫大的經濟損失。目前對於口蹄疫發生場的處理方法,是以撲殺、消毒及疫苗接種等為主。疾病診斷最重要的一點,即是能快速準確地檢出罹病動物,以消弭病毒的散播感染,因此診斷技術的開發更顯其重要性。有鑑於此,未來以分子生物學方法製作量產口蹄疫融合蛋白質並應用於多重用途將深具潛力。本試驗所構築含有FMDV之抗原決定位VP1基因上之G-H loop (134-158a.a.) 於pCM6質體。先以PCR方法製造出與纖維素具親和力的CBD (Cellulose Binding domain;約4 KDa) 和FMDV VP1融合蛋白質片段,並分別嵌入表現載體pET32a,進而轉移送入E. coli中。利用高密度發酵原理,控制含氧量、溫度、轉速及pH值,將細胞量增殖到最大,並以最低量IPTG之最終濃度20μM誘導表現融合蛋白質。經SDS PAGE分析結果可呈現出約30%表現率的30 KDa融合蛋白質,Western blot分析證實此融合蛋白質結構的確能與FMDV 抗血清結合反應。經DNA定序已確認核酸序列與原始設計相符。將所獲得的融合蛋白質,以各種純化方法及條件取得高純度且具生物功能的蛋白質,將來可提供研發檢驗試劑之抗原基質,另一方面,本產物亦可供特異性單株抗體之製備、蛋白質晶片 (Protein chip) 之開發及重組次單位疫苗之研發等多項用途。