第五章細菌之同定(獸醫科技資訊網)

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第五章細菌之同定

內容

5.1.

細菌之同定與鑑定

　　由細菌分離培養之成果，部分之細菌能立刻決定為某種特定之細菌，並判定該菌為病原菌者，如無法決定時，須要對主要菌落的菌行純粹培養，並予以同定及鑑別。

　　細菌之同定依其形態學性狀，培養性狀，營養要求性，生化學性狀，免疫血清學性狀及有關病原性等決定其菌種及菌型。

　　在檢查期間中避免被檢菌株之死滅或變異，對其繼代保存要十分注意，一般對細菌，病毒或免疫血清等保存，以凍結乾燥法為最佳，其次以凍結保存 (－15℃～18℃) 亦可。

5.1.

1. 細菌之形態

1.	外形：球狀、桿狀 ( 長短 )、絲狀、弧狀、螺旋狀。
2.	菌軸：直線、彎曲。
3.	大小：長度、寬。
4.	菌側：平行、膨脹、凹、不規則等。
5.	兩側：圓、平、凹面、尖、鈍圓。
6.	配列：單個、雙連、鎖狀、4 個排列、成群狀、葡萄狀、8 個並列成立方、成束狀、成不規則塊狀。
7.	正規形態之變化：形及大小之變化，棒狀、絲狀、舟形、紡綞形，染色性之減弱。
8.	運動性：有無、強弱。
9.	鞭毛：位置與數量，菌體之一端有一根 (Monotrichate)，兩端各有一根 (Amphitrichate)，在一端有數根 (Iophotrichate)，周圍有很多 (Peritrichate)。
10.	芽胞：形狀 ( 球形、卵形、橢圓形 )，位置 ( 在一端，中央、靠近一端 ) 數量 ( 一個，多數 )。
11.	莢膜：有無。
12.	染色：一樣、不規則、極染色、異染小體、Gram 染色、抗酸性染色。

5.1.

2. 培養所見

1.固定培養基之表面菌落

(1)	外形：圓形、不規則、放射形、樹根狀、擴散。
(2)	大小：直徑有幾 mm，但注意培養基之種類、厚薄、培養溫度、時間、菌落密集或稀疏等就有差異。
(3)	隆起：厚薄、半球形、上面扁平、中央凸、中央凹、娘菌落、形成粘液堤。
(4)	構造：均質、露滴形、微細顆粒狀、粗大顆粒狀、絨毛狀、葉脈狀等。
(5)	表面：平滑、粗、顆粒狀 ( 微細、粗大、中等 )、乳嘴、乾燥、濕潤。
(6)	邊緣：平滑、波狀、大葉狀、鋸齒狀、絨毛狀、擴散性。
(7)	顏色：無色、灰色、產生色素、光澤、無色澤、螢光、發光。
(8)	硬度：脂狀、粘稠、膜狀、沙粒狀。
(9)	臭味：有無、像什麼？

2.穿刺培養：

(1)	發育之程度：有無，在何處最能發育。
(2)	發育之狀態：線狀、樹枝狀。
(3)	表面之發育：有無、大小、邊緣、表面。
(4)	液化：有無。
(5)	顏色：透明度。

3.液體培養基：

(1)	發育之程度：無、微弱、中等度、旺盛。
(2)	混濁：有無、程度、均質、顆粒狀、凝塊。
(3)	沉澱：有無、量、狀態。
(4)	表面發育：有無、有無形成菌膜、菌膜之性狀、搖動後是否容易散開。
(5)	瓦斯產生：有無。
(6)	指示藥之顏色變化：有無。
(7)	臭味、著色、粘稠度、凝固：有無。

4.血液瓊脂上的溶血性檢查：

(1)

血液瓊脂的製備

100℃ 加熱溶解保持 50~55℃ 的基礎培養基混合血液，其方法有兩種。

(1)

燒瓶的基礎培養基添加所需要的血液量，小心混合 ( 不要起泡 ) 後，無菌操作分裝於平皿或試管。

(2)

先以 1~2ml 的血液分注在平皿內，然後加 20ml( 徑 9 公分的平皿 ) 的基礎培養基，並小心混合。試管即先滅菌培養基，保持 50~55℃ 然後加血液 5~10%，混合後做斜面或高層。

註：	要加的血液量以 5-10% 最為適當，血液量過多難以判定溶血性。含有葡萄糖的血液瓊脂，對溶血鏈球菌的 A 及 B 群細菌不呈現 β 溶血，引起 α 溶血後難與綠色鏈球菌區別。
	良好的血瓊脂以 pH 6.8 來製備，可以提高血球的保存性，且能顯示溶血環。

(2)

溶血性檢查

以混合稀釋培養的深部菌落比表面塗抹培養所發生的菌落較為正確。α及β溶血環除肉眼觀察外，應以顯微鏡來觀察。

(1)	β型鏈球菌－菌落由透明環所包圍，裡面不見有紅血球的存在，透明環的外緣與菌落的邊緣呈平行，但表面菌落即透明環中有少許紅血球點存在，如有此現象應以稀釋培養後再檢查。
(2)	α型鏈球菌－在菌落周圍有β溶血，但在顯微鏡之下溶血環中散見紅血球，或菌落周圍有紅血球固著，其外側能看到溶血環，若有紅血球綠變者不管有無溶血環，可判定為α溶血。

葡萄球菌的溶血性試驗

溶血性	紅　　血　　球
溶血性	兔	綿羊	人
α	周邊界線不太明顯，溶血環稍大	與左稍微相似，溶血環稍小	陰性或疑陽性
β	陰性	Hot-cold lysis 如年輪狀的溶血環	陰性
δ	陰性	陰性	周緣界線均甚明顯的溶血環

5.1.

3. 扺抗性

　　對細菌之物理化學抵抗性做檢查，如對溫度及各種消毒水抵抗性。

　　60℃ 30 分鐘 ( 鏈球菌及其類似菌 ) 檢查法：在肉羹或血清肉羹的 24 小時培養後，移植於血清瓊脂斜面，培養 24 小時後檢查有無發育，如發育即表示在該條件下具有殘存力。

　　60℃ 4 小時及 50℃ 8 小時檢查法：Mycobacteria 或 Nocardia 接種於兩支固體培養基，一支放在水槽，經一定時間之後取出，冷卻，然後兩支試管在 37℃ 之下培養一個月，定期檢查其發育。

5.1.

4. 新陳代謝

1.	氧氣：好氧性、厭氧性、通性厭氧性、微好氧性 (Micro-aerophilic)。
2.	溫度：發育可能之溫度範圍，最適合溫度。
	測定發育溫度範圍：
	此種試驗的一般原則，即將供試的細菌輕輕接種適當的培養基，以各種的溫度培養，如要 37℃ 以上的溫度試驗，以使用能調節溫度 (±0.5℃) 的水溫槽較為正確。
	好氧性芽胞形成菌，Mycobacteria 或 Actinomyces 等細菌使用固形斜面培養基較佳，其他可用液體培養基，鏈球菌用 Abdel-Malek 及 Gibson (1948a)推薦的 Litmus milk ，又普通牛奶中無活性細菌，可加葡萄糖及酵母抽出液各 0.25%。
	一般檢查的方法，在 22℃ 或以上的溫度，須每日檢查至第 7 日，又低溫檢查時分別在第 7 日及 14 日檢查有無發育。
3.	色素之產生：Chromobacterium 的菌種者，用 Mannitol，Yeast extract agar 在 22℃ 或 37℃ 培養。
	Mycobacterium 的菌種，其色素的產生與光線的影響對所謂非定型或無名 Mycobacteria 的分類有重要的關係，因此 Marks 及 Richars(1962) 推薦，如需要連續在光線下培養，即在 37℃ 恆溫箱裝上 25w 電燈泡，放在 Lowenstein-Jensen 培養基上 30~60cm 處照明。
	Pseudomonas 的菌種用 King，Ward 及 Raney 的培養基培養，培養基 A 要在 37℃ 培養 24~96 小時，培養基 B 要在 37℃ 培養 24 小時，然後繼續在 22℃( 或室溫 ) 培養 72 小時。
	Serratia marcescens 培養在普通瓊脂，Mannitol-Yest extract agar，king ,Ward 或 Raney 的培養基 A，在 22℃~30℃ 培養觀察。
	Staphylococcus 與 Micrococcus 在自然的散光下最能產生色素。目前尚無誘導產生色素的最好培養基。
4.	對培養基成份之影響：培養基加血液、血清、葡萄糖、甘油、硝酸鹽、膽汁，膽汁酸鹽或其他之物質，觀察對發育之影響。

5.1.

5. 生化學的性狀

　　請參第二章培養基 ( 四 ) 生理學及生化學檢查用之培養基製造法及試驗。

觸

試驗 (Catalase test )

　　以一置 37℃ 培養 18~24 小時的瓊脂斜面培養 * 加入 1ml 的 3% H₂O₂，將試管傾斜，如很快產生氣泡即屬陽性反應；Micrococci 及 Staphylococci 皆 Catalase 陽性：Streptococci 及 Pheumococci 為陰性。Bacillus 菌種亦為 Catalase 陽性。

　　此試驗亦可用經 24~48 小時培養的肉湯或 thioglycollate 培養基 ( 微嗜氧性及厭氧性菌 ) 加入 1ml H₂O₂ 再觀察氣體發生情形。此種試驗不能在 Blood agar plate 上施行，因紅血球內含有 Catalase 。

* 斜面培養需接種大量細菌，時間過久的培養不適於本試驗。

硝酸鹽還原試驗 (Nitrate reduction test)

I 液：

8gm 的 sulfanilic acid ( 氨氣苯磺酸 ) 溶於 1000ml 的 N/5 CH₃COOH。

II 液：

5gm 的 alphanaphthylamine 溶於 1000ml 的 N/5 CH₃COOH。每樣試藥加 5 滴於試管內，如有亞硝酸鹽存在，則在一兩分鐘內可見紅色發生此為陽性反應。有些細菌可把硝酸還原成氮或氨，是以此時即呈陰性反應，故若不先察看有無未還原的硝酸鹽存在與否，則不可報告此試驗為陰性，如還原試驗陰性時可加極少量的鋅粉於已試驗為陰性之培養基內，如有未被還原的硝酸鹽存在則可見呈紅色，如此才能肯定此試驗為陰性，又此試驗需在 37℃，經 24到 48 小時培養之後再做。
亞硝酸鹽標準液 Mycobacteria 之硝酸鹽還原試驗。

a.	配製 M/100 NaNO₂ 溶液：溶解 0.14gm NaNO₂ 於 200ml 蒸餾水。
b.	準備 13 支試管，用 2ml NaNo₂ 做兩倍連續稀釋。

色素之原還：如美藍、中性紅、Litmus 等。

糖類之分解：

3.4. 請參照第四章

乙醯甲基羰試驗 Voges-Proskauer (acetyl methylcarbinol test) (Coblentz：Am. J. Pub. Health 33：315,1943)

試驗：

A.	α-naphthol (5%) 溶於無水乙醇。
B.	KOH(40%) 內含 0.3%Creatine ( 肌酸 )。

步驟：

a.	從 MR-VP broth 經 48 小時培養之細菌，取 1ml 菌液於一清潔 Wassermann 試管。
b.	管內加入 0.6ml A 液。再加 0.2ml B 液。
c.	混合均勻，置 10 分到 20 分鐘，如有 acetylmethylacarbinol 產生，在表面上可見鮮明的紅色然後漸及整個肉湯管。

甲基紅試驗(Methyl red test )

(Clark and Lubs：J. Infect .Dis ,17：160, 1915)

於 5ml MR-VP 肉湯培養菌液中，加入 5 滴 methyl red 溶液，如有酸產生，可見明顯的紅色，此為陽性反應。陰性反應則呈黃色。

Escherichia coli 及其他 methyl red 陽性的細菌會在此種培養基內分解葡萄糖而產生酸，故指示劑變紅色。試劑之配製以 methyl red 0.1gm 溶於 300ml 的 95% 酒精，再以蒸餾水稀釋至 500ml。

對蛋白質或氨基酸之作用及其他有關試驗

硫化氫產生試驗 (Hydrogen Sulfide Production )

(a)

醋酸鉛紙試驗 (5×1 cm) 泡浸以 5% 醋酸鉛液，置空氣中乾燥之，高壓滅菌 15 磅 15 分鐘。把細菌接種於含硫液體培養基，在塞子和管內壁間插入一張醋酸鉛紙條 ( 不要接觸到液體 )，硫化氫產生則紙條下部份會變黑色。

陰性反應時可加入少許 2N HCl 於管內再塞緊，硫化物會被溶解釋出硫而和紙條的鉛作用，則變為黑色硫化鉛。

註：	因此試驗相當靈敏，故在 TSI agar 的底部反應是陰性或微陽性時，此酸鉛紙條試驗則呈陰性。

(b)

Triple sugar iron (TSI) agar method ( 三糖鐵瓊脂試驗法 )：把細菌接種於 TSI 培養基底部 (butt)，硫化氫之產生可由 butt 變黑察知，亦可放醋酸鉛紙條於塞子和管內壁試驗之。

Tween 80 水解作用基質

M/15 磷酸鹽緩衝液，pH7	100	ml
Tween 80	0.5	ml
Neutral red (0.1% 水溶液)	0.2	ml

(a)	分裝上液於 16×125mm 有螺帽試管，每管 4ml 量
(b)	高壓滅菌 121℃，15 分鐘
(c)	置 37℃ 孵育過夜試其無菌性。溶液顏色為琥珀色或稻草色。
(d)	貯於冰箱，不可逾 2 週
	此基質乃供試驗某些 Mycobacteria 菌株對 Tween 80 的水解作用，如能作用，則 Tween 80 被分解而成油酸，指示劑及變色。

Gluconate oxidation test

(Haynes：J. Gen. Microbiol .5：939,1951)

Pseudomonas aeruginosa 能夠把葡萄糖或 gluconate 氧化成 ketogluconate ，此物能還原銅鹽 (Benedict 氏溶液中之銅鹽 )，故此法可鑑定不產生顏色的 Ps. Aeruginosa。

試驗時以一片 gluconate substrate 加於 1ml 蒸餾水中，大量接種細菌，置於 37℃ 培養 12-18 小時，隨後以培養菌用 Benedict 氏溶液來試驗，如有還原作用 ( 陽性反應 )，則顏色由藍色變為黃綠色。

馬尿酸鈉水解氨化鐵試驗 (Ferric chloride test for detecting the hydrolysis of sodium hippurate )

(Ayers and Rupp: J. Infect . Dis 30：388,1922)

試驗：

　　將 12g 的 FeCl₃．6H₂O 溶於 100ml 的 2% HCl 水溶液。

步驟：

　　在裝有 sodium hippurate broth 的試管，培養基之量應作記號，在貯存及培養時，因為蒸發而致 sodium hippurate 的濃度會增加，而此物之濃度需正好為 0.1%，故在培養後及試驗前，應以蒸餾水補足，以免發生偽陽性反應。

　　由 sodium hippurate 培養內，取 0.8ml 菌液至一小試管 (Wassermann 試管 ) 再加 0.2ml 試藥，隨即混合之，10~15 分鐘後觀察之，如可得到耐久的沉澱，即係有 Benzoic acid ( 苯酸 ) 的存在，亦即陽性水解作用，因為 sodium hippurate 先沉澱，再加入的部分試藥所溶解，而過量的試藥也會溶解 benzoic acid，故試藥和培養基必須保持平衡。所以所用的試藥量應精確量度，同時應做無菌培養以為對照試驗，如培養物甚為混濁，判讀易致混淆，可多離心，而以上清液作試驗。

Neisseria 氧化試驗 (Oxidase test )

　　(Gordon and McLeod：J. Path. Bact. 31：185,1928) 配 1%Paraamino dimetyl-anilline monohydrochloride (單鹽酸氨基二甲苯胺 ) 溶液，以 0.1gm 試藥，溶於 10ml 自來水或蒸餾水，靜置 15 分鐘後或紫色出現方使用。此液需立即使用，因只在 1-2 小時內有效，對疑似 Neisseria 菌落滴加幾滴試藥，菌落產生 Oxidase 時則先呈粉紅色，繼轉變成紅色最後變為黑色。粉紅色的菌落尚可活，但顏色變黑色，則已死亡。又此試藥不會影響 Gram 染色反應。

　　亦可用 1% tetramethyl para-phenylenediamine dihydro-chloride ( 雙鹽酸四甲基對苯二胺 ) 水溶液，此藥毒性較少，菌落成為紫色，最後成為紫紅色，此藥會使用周圍培養著色且比前者較貴。

Oxidase test for Pseudomonas (Kovacs：Nature 178：703,1956)

試驗：

Tetramethyl paraphenylenediamine dihydrochloride *	0.1	gm
蒸餾水	10	ml

　　染料溶於水沖，靜置 15 分鐘後使用，每次用時應重新配製，此液 2 小時內有效，在 Whatman No.1 濾紙（6 公分）滴 2、3 滴試藥，取少許可疑菌落置於藥紙上，以白金耳線塗抹之，Oxidase 陽性者在 5~10 秒間即呈暗紫色。

　　* Para-aminodimethylaniline monohydrochloride 可替代之。

靛基質試驗 (Tests of indol)

Ehrlich 氏靛基質試驗 (Ehrlich indol test)

(Modification of Bohme；Centralbl. Bakt, orig.40:129,1906)

試藥：

對二甲氨基苯醛 paradimethylaminobenzaldehyde	2	gm
95% 乙醇	190	ml
HCl (conc.)	40	ml

　　在培養 48 小時的蛋白 ( ) 肉湯 (tryptone broth) 或胰酪消化酪蛋白豆肉湯 (trypticase broth) 或其他適當的培養菌液內加入 1ml 乙醚 ( 或二甲苯 ) 振搖後靜置幾分鐘後讓乙醚浮在表面，再沿管壁緩慢加 0.5ml 試藥，則在培養基乙醚間形成一環，如細菌產生 indol ( 此可溶於乙醚 )，則在乙醚層下出現鮮紅的色環，此為陽性反應，如無 indol 產生，則仍為無色。

Kovacs 氏靛基質試驗

試藥：

戊醇或戊二醇	150	ml
Paradimethylaminobenzaldehyde	10	gm
濃 HCl ( 純 )	50	ml

　　先把醛劑溶於酒精，再慢慢加入酸，配製少量即可，不用時貯於冰箱。細菌接種於 tryptophan broth ，置 37℃ 培養 48 小時，加入 5 滴試藥，如有 indol 產生時，則成深紅色。

10.

Cytochrome oxidase test

　　斜面瓊脂或平皿瓊脂上接種細菌，其上面加 1% Paraamino dimethyl aniline monoydrocholoride 溶液及 1% alpha naphtal ethanol 溶液的等量混合液，陽性培養菌呈青色。

11.

凝固酶試驗 (Coagulase test)

方法1.　(Cowan；1938b)

　　稀釋的血漿 0.5ml 加同量的 18~24小時肉羹培養菌液，混合後置放在 37℃ 4 小時，第 1 小時與第 4 小時觀察無凝固物，陰性的試驗管在室溫放一夜再檢查。

方法2.　(Gillespie 1943)

　　血漿以生理鹽水 10 倍稀釋，取其 0.5ml，加以 18~24 小時肉羹培養菌之細菌 0.1ml，在 37℃ 第 1.5 及 6 小時後，檢查凝固物，陰性者放在室溫一夜，再檢查。

5.1.

6. 血清學的性狀

　　一般以凝集反應，沉降反應，補體結合反應為多，因具有特異性及迅速性，故已廣泛應用於臨床診斷，並且其結果一般比其他之方法正確，因此在細菌分類上亦頗為重要。

5.1.

7. 病原性

　　普通使用家兔、天竺鼠、小白鼠以各種接種法檢查其病原性。

5.2.

主要細菌分離法鑑定

5.2.

1. 嗜氧性菌 ( 好氣性 ) 培養

1. Gram 陽性球菌

(1)

如葡萄之房狀排列，大型著色性光澤之菌落：葡萄球菌 (Staphylococcs)。

(2)

在液體 Medium 形成短或長形連鎖，在膿中呈雙球狀：鏈球菌 (Streptococcus)。

a)	Pyogenic ( 化膿性 ) 鏈球菌群：以溶血性來鑑別，依 Lancefield 之沉降反應做血清型鑑別，不會在 45℃ 發育。
b)	Viridans ( 綠色溶血 ) 鏈球菌群：綠色溶血，在膽汁酸鹽之下不會溶菌，不分解 Inulin，在 45℃ 發育，在 10℃ 不發育。

(3)

Enterococcus ( 腸球菌 ) 群：一部分溶血性，一部份非溶血性，在 10~45℃ 能發育，對 60℃ 30 分鐘之加熱具有扺抗性，在 1% Methylen blue，6.5% NaCl 中能發育，血清型歸納為 Lancefield 之Ｄ群，學名謂 Streptococcus faecalis。

(4)

肺炎球菌：( 綠色溶血，厭氧性培養呈β溶血 ) 在膽汁酸鹽之下會溶菌，莢膜之形成甚明顯，Inulin 分解，依特異抗血清之莢膜膨化反應而決定型別。

2. Gram 陰性球菌：大部分是雙球菌球，好氧性發育：Neisseria。

3. Gram 陰性桿菌：

(1)

在普通瓊脂發育良好，分解各種糖類，大部份無莢膜，在運動性 ( 周毛性鞭毛 ) 或無運動性，大部分能在含有膽汁酸鹽之腸內細菌選擇培養基 ( 如 MacConkey agar, DHL agar, Desoxycholate agar) 發育。

a.	在 TSI ( 或 Medium) 24 小時內不分解葡萄糖者非腸內細菌。又 Cytochorme，Oxidase 試驗陽性者非腸內細菌。
b.	懷疑腸內細菌時，可培養於確認培養基 (TSI，Kligler, SIM, Simons 之枸櫞酸鹽培養基，MR. VP 等培養基 )，並進一步做種種生化學性狀檢查決定菌群，然後行血清學做抗原分析決定血清型 ( 可委託專門機關 )。Salmonella 及 Shingella 通常不分解乳糖，不產生 Indol ，多種大腸菌與 Salmonella 均有運動性。
	大部分之 Salomonella pullorum gallinarum ( 雛白痢菌 ) 無運動性，不產生 H₂S。

(2)

需要特別成分添加在培養基及須要培養條件者，不分離糖或弱分解，無莢膜，非運動性－Brucella ，本菌群更要檢查 CO₂ 要求性，H₂S 產生性，色素感受性及凝集素吸收試驗或以單相血清 (Monospecific serum) 之凝集反應鑑定型別。

(3)

在培養基不添加特殊成分即呈發育不佳或不發育，無運動性，莢膜形成不一定－Hemophilus 及 Moraxella。

(4)

大形有莢膜，粘稠性菌落，可分解大部分之糖類－Klebsiella ，依腸內細菌鑑別法再行詳細檢查。

(5)

兩端染色性，在普通瓊脂能發育，但需要血液成分，分解糖類，不凝固牛乳培養基。

(6)

兩端濃染性，纖維狀菌形，在普通瓊脂發育，在馬鈴薯培養基如蜜樣發育，分解糖類產酸，不產生氣體，牛乳凝固較遲－Actinobacillus。

(7)

有特異性之游走性菌落 (Swarming)，分解葡萄糖與尿素，周毛性鞭毛之運動性－Proteus。

(8)

a.	不分解大部分之糖類，端毛性鞭毛運動性，產生水溶性色素－Pseudomonas。
b.	不產生色素，使牛乳培養基變成鹼性－Alcaligenes faecalis。

(9)

赤色菌落，最小菌群，其他性狀如大腸菌－Serratia。

(10)

在簡單的鹼性培養基 (Pepton water 等 ) 發育彎曲之桿菌，端毛性鞭毛運動性－Vibrio。

4. Gram 陽性桿菌：

(1)	非運動性，配列如松葉狀，顆粒染色性-Corynebacterium，以生化學性狀來鑑別。
(2)	非運動性，有時如纖維狀長連鎖，Catalase 陰性，Esculin不分解，Gelatin，高層穿刺培養呈棕刷樣發育，－Erysipelothrix insidiosa ( 豬丹毒菌 )。
(3)	運動性 ( 低溫培養也能活潑發育 )，短桿菌，Catalase 陽性，Esculin 分解－Listeria monocytogenes。
(4)	非運動性，抗酸性染色性－Mycobacterium，其中以 M. tuberculosis，M. Bovis, M. avium 最重要，如何與非病原性菌鑑別，仍要依培養性狀與病原性試驗。
(5)	芽胞形成 ( 中心芽胞 )－Bacillus 病原性菌中最重要者炭疽菌 (B.anthracis ) 而已，在普通瓊脂發育，固形培養基呈有特殊之絨毛狀菌落，無運動性，在短時間內對小試驗動物會引起敗血症死亡，在動物體內形成莢膜，簡易迅速同定可用 Ascoli 氏反應決定。

5.2.

2. 厭氧性菌培養

1. Gram 陽性球菌

(1)	大部分呈菌塊狀：有時雙球菌狀－厭氧性 Staphylococcus (Pepto coccus)。
(2)	主要雙球菌或連鎖－厭氧性 Streptococcus (Peptostreptococcus)

2. Gram 陰性球菌

　　不規則菌塊，微小球菌，在口腔內 ( 牙齒之化膿症 )，泌尿生殖器道，反芻胃內－Veillonella 。

3. Gram 陰性桿菌

(1)	有運動性或無運動性，多形性，不形成芽胞，有腐敗臭氣－Bacteroides ( 腐敗菌 )。
(2)	菌端膨化，滲出性菌落，發育困難－Fusiformis(Fusobacerium)。

4.	Gram 不定性，形成真性菌葉，分枝，非抗酸性 Actinomyces,Gram 不定，在固形培養基發育慢，菌落乾燥如結核菌易碎之菌落，在液體培養呈顆粒狀附著玻璃壁，無染色押捺標本呈定型的棒狀菌形。

5.	Gram 陽性桿菌，運動性或無運動性，菌彎曲，做端立芽胞，部分需微好氧性培養－Clostridium，本菌群多為死物寄生菌，部份菌能產生毒素對人獸有強烈之病原性，依生物學的性狀，病原性試驗及特異菌體外毒素鑑別。

表 3. Enterobacteriaceae 之鑑別試驗

表 4. 腸內細菌之生化試驗鑑別法

表 6. 腸桿菌科 (Enterobacteriaceae) 之分離與鑑定