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(一)病名及病原

1.病名：牛副流行性感冒

2.病原：係由副流行性感冒 3 型病毒 (Parainfluenza type 3 virus；PI3) 所引起的疾病，本病發生於牛的輸送時受緊迫較易發生，故以前亦稱為輸送熱 (shipping fever)。 

(二)疾病簡介

 　　牛副流行性感冒 3 型 (Bovine Parainfluenza type 3；PI3) 係由副黏液病毒 (Paramyxovirus) 感染引起的熱性傳染病。以呼吸症狀為主，對人、綿羊、豬、猴子、犬、天竺鼠、小白鼠等均會感染。本病在世界各國均有發生，在台灣筆者等於1992年首次在屏東縣牛隻發生呼吸症狀及流鼻液的病例分離到病毒，而確認本病之發生。 

(三)典型之臨床症狀及病理變化 　　

感染牛呈 39.5-40.5℃ 發熱，白血球減少症，精神消沈，食慾減退或消失，初期排出水性或粘液性之鼻汁，至恢復時變為膿性伴隨咳嗽，異常肺泡音等呼吸症狀為多。本病的發生以輸送時的小牛及集團肥育的牛群較為常見，本病如再由其他病毒或 Pasteurella multocida、P.haemolytica, Mycdplasma 等各種細菌複合感染時，其症狀更加惡化。泌乳牛被感染後，可在乳汁中排出病毒並發生乳房炎。 　　本病的主要感染路徑為上呼吸道感染，病毒藉由感染牛鼻汁泡沫感染或由乳汁感染。雖然本病一年四季均會發生，但仍以冬天至春天較多。 牛副流行性感冒 3 型的患牛常併發肺炎病例，在肉眼上可見肺前葉及中葉呈肝變化，組織學變化在肺泡壁可見融合巨細胞，細支氣管上皮、肺泡上皮及遊離上皮性巨噬細胞均能見到質內及核內包涵體。 

(四)應採病材

 　　發現牛隻有呼吸症狀及流鼻液的現象可以採集鼻液及加抗凝劑的血液供病毒分離。牛隻若解剖檢查時，應採集肺臟、脾臟、腦組織供製成乳劑以供病毒分離。  

(五)綜合診斷 

1.牛副流行性感冒 3 型病毒之分離及同定

 分離病毒用之感受性細胞可用胎牛睪丸初代細胞、胎牛腎臟細胞或是株化 MDBK 細胞，以 24 孔組織培養盤先行培養形成單層細胞，於接種前以無菌 PBS 或 MEM 清洗細胞，然後接種 0.2mla 液或是臟器的乳劑上清液，放在 37℃ 5% CO₂ 的恆溫箱中進行吸著作用 30 分鐘。再將乳劑吸後以 PBS 清洗細胞 3 次，然後加入含 2% 胎牛血清 ( 血清不含有抗牛副流行性感冒 3 型病毒抗體 ) 的細胞培養液 1ml 再送入 37℃，5% CO₂ 的恆溫箱中培養，並觀察 2-7 日看是否有細胞病變產生。初代分離若沒有細胞病變產生，必須再做 2 至 3 次繼代。而有細胞病變產生之上清液可進行電子顯微鏡檢測，或是血清中和試驗作為診斷依據。 

(1)電子頗微鏡檢測：

 從接種乳劑產生細胞病變的細胞上清液，或是採集的鼻汁，先以 3,0OOrpm 離心 30 分鍾去除雜質，然後再以超高速離心 10 分鐘 (90,000rpm 氣動式離心機 )。取出沉澱物經負染色後，以電子顯微鏡檢測有無病毒顆粒。

(2)血清中和試驗檢測： 

將分離的病毒株進行 10 序列連續稀釋後，加入抗牛副流行性感冒 3 型病毒的標準血清進行中和試驗，以血清中和的病毒力價和未加血清的病毒力價比較，以証實病毒是否受標準血清中和，而判定分離的病毒是否為牛副流行性感冒 3 型病毒。

2.免疫學診斷方法 牛隻一旦受到牛副流行性感冒 3 型病毒感染後，其體內會產生抗病毒之特異性抗體，故檢測牛血清中是否有抗體就可以診斷牛隻是否已感染病毒。介紹下列二種方法供檢測牛副流行性感冒 3 型抗體： 

(1)中和試驗： 

測試中和抗體之前先要準備一批試驗用病毒，測試其病毒力價，然後小分裝保存於下 -80℃ 冰箱中，待每次作中和試驗時取出稀釋使用。受測試的血清必須先經非動化 ( 在 56℃ 水浴槽浸置 30 分鐘 )，以去除非特異反應因子。取血清 0.05ml 和稀釋液 (MEM)0.05ml 混合在無菌平底培養盤上做兩倍序列連續稀釋，並對每一個稀釋倍數做 4 個重複，然後加入 0.05m1( 含 200TCID) 的病毒液，經震盪混合均勻後，再送入 37℃5%CO₂ 之恆溫箱進行感作 l 小時。經感作後加入 0.1ml 含 3×10⁵ 個細胞的細胞懸浮液，並震盪混合均勻，再以透明膠帶封住，送入恆溫箱培養觀察。經觀察 7 天後以形成單層細胞但未產生細胞病變的最高稀釋倍數換算為血清中和抗體力價。並以抗體力價大於或等於 2 倍而判定為牛副流行性感冒 3 型抗體陽性。

(2)血球凝集抑制法試驗 (KemaggIutination Inhibition test；HI) 

牛副流行性感冒 3 型病毒經証實可對牛的紅血球有凝集性，因而可藉此特性進行血清學的 HI 力價測試，以証實有無抗牛副流行性感冒 3 型病毒的抗體，而可檢測出是否受病毒感染。 該試驗所用之病毒抗原是以胎牛腎臟細胞增殖病毒後濃縮而成。試驗時先進行病毒凝集抗原的力價測試，所用的抗原稀釋液是磷酸緩衝鹽水 (VBS,PH=6.0)，進行 2 倍序列連續稀釋，再加入 0.3% 以 VBS 稀釋的牛紅血球懸浮液，經震盪後放置在 4℃ 冰箱於過夜反應後判定抗原紅血球凝集力價。而進行血清 HI 反應時是用 4 單位的紅血球凝集力價。 牛血清在進行 HI 測試前須先經過非動化處理 (56℃30 分鐘加熱處理 )，然後取 0.5ml 血清液和以 VBS 泡製的 25%W/V 白陶土 (Kaolin) 懸浮液在室溫連續震盪處理 30 分鐘，再以 3,000rpm 離心 15 分鐘。所得到的上清液即為經過處理的 2 倍稀釋血清稀釋液。然後再取 0.025m1 做 2 倍序列連續稀釋，及加入含 4HA 單位的病毒液 0.025ml，經度盪均勻後放在 37°C 潮濕恆溫箱感作 60 分鐘，然後才加入 0.3% 牛紅血球懸浮液 0.025ml，經震盪均勻靜置在 4℃ 冰箱過夜反應後判定。以抑制病毒凝集血球的最高稀釋倍數足為 HI 力價。並以 HI 力價大於或等於 2 倍而判定為牛副流行性感冒 3 型抗體陽性。

3.病理學診斷 牛副流行性感冒 3 型的患牛常併發肺炎病例，在肉眼上可見肺前葉及中葉呈肝變化，組織學變化在肺泡壁可見融合巨細胞，細支氣管上皮、肺泡上皮及遊離上皮性巨噬細胞均能見到質內及核內包涵體。同時由於病毒性的感染，往往會在腦有非化膿性腦膜腦炎病變，再配合肺臟的肺泡細胞及氣管粘膜上皮細胞的組織病變，可作為牛副流行性感冒 3 型病毒感染的診斷依據。

  (六)確診依據 　　

目前本病的診斷依據是以病牛的病毒分離為主，尤其牛隻在呈現體溫上升及呼吸症狀的分泌液時，所採集的病材病毒分離率較高。而發生牛群的抗體反應也可為診斷依據。  

(七)參考文獻