廿七、雞腦脊髓炎
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(一)病名及病原
1.病名：雞腦脊髓炎 (AE) 最早定名為傳染性震顫 (Epidemic tremor)，至 1939 年經美國獸醫學雞病命名委員會將本病定名為雞腦脊髓炎。
2.病原：雞、火雞、雉雞及鵪鶉對本病皆有自然感受性，而以幼齡鳥類之感受性最高，臨床孵出二週齡內幼雞有運動失調或震顫等症狀，但中雞感染不會發病，產蛋雞感染產蛋率僅呈輕度降，但是種雞被染後直至恢復後兩週內所產的種蛋，孵化率較差，且孵出的小雞，也會有較高的發病率。 AE 之病原小型核醣核酸病毒 (Picornavirus) 群中之腸病毒 (enterovirus)，病毒大小約為 20-30nm。
(二)疾病簡介
雞腦脊髓炎 (AE) 最早由 Jones 於 1930 年於美國麻州之小雞發現本病，於 1934 年 Jones 將本病命名為傳染性震顫 (Epidemic tremor)，至 1939 年經美國獸醫學雞病命名委員會將本病定名為雞腦脊髓炎。台灣則由筆者等於 1968 年發現病例並首次確認病毒的存在，因 1971 年曾發現在檢疫期間的進口種雞發生病例，因此推測 AE 可能係經由進口種雞而入侵台灣雞群。本省於 1971 年有高發生率，往後者呈散發性。
(三)典型之臨床症狀及病理變化
1.臨床症狀：
運動失調、麻痺、頭頸部震顫等為主徵。初期患雞精神差、不活潑、然後步代不穩、嗜眠，如把病雞提起，頭頸部呈輕微震顫。重症者頭頸歪曲，臉無法對正面，腳麻痺至癱瘓，無法採食或飲水終至死亡。一般在臨床上所觀察的症狀，可分類為僅有運動失調者佔 36.9%，震顫佔 18.3%，兼有兩症狀者 35.6%，無症狀 9.2%。死亡雞隻大都因飢餓或被其他小雞踐踏而亡，其耗損率約 15%，有時可高達 60%，產蛋雞被感染時的產蛋下降率在 5~10%，需經過 5-14 日病程後，始能恢復，孵化率也會降低約 5%。
2.內眼病變：
耐過雞除眼精水晶體之混濁及黏著以外，其他臟器皆無可見肉眼病變。
3.組織病變：
AE 病毒主侵犯運動神經，造成大型神經細胞呈中心性色質融解 (central chromatolysis) 現象，此為其特徵性變化。病變以脊髓的灰白質，尤其腹角部位、小腦、延髓、中腦、間腦等諸神經細胞皆可見前述之特徵變化。感染早期於中樞神經可見淋巴球圍管、噬神經現象 (neuronhpagia)、小神經膠細胞結節等非化膿性炎的病變。其他組織如腺胃及肌胃的肌層、胰、心肌的間質等均可見淋巴球呈濾泡漾浸潤。
(四)應採病材
早期感 ( 臨床症狀出現 2-3 天 ) 病雞之腦，以無菌操作方式採集，保存於 -20℃ 或 -80℃ 之冰箱內以供病毒分離。
(五)綜合診斷
1.病原分離及同定：
(1)將病材以培養液製成 5-10 倍乳劑後，遠心 1000xg、10 分鐘，收集上清液，加入抗生素如 Penicillin(1000IU/ml) 及 streptomycin(100μg/ml) 於進行病毒分離。
(2) a.接種1日齡小雞腦內以分離病毒： 抽取 (1) 製備之上清液 0.025-0.03ml 接種於對 AE 病毒有感段性之一日齡小雞腦內。於接種後 1-4 週內觀察是否有 AE 之臨床症狀出現，若有則收集該小雞之腦組織，再接種於有感受性之小雞做連續性繼代。b.接種雞胚之卵黃囊內以分離病毒： 取 (1) 製備好之上清液 0.2-0.5ml 接種於 5-8 日齡之 SPF 雞胚之卵黃囊內。
10 天後觀察有否雞胚腳趾捲曲及雞胚呈矮小化等病變。(3)電子顯微鏡學檢查：
本病毒係小型的 RNA 病毒，屬微小核糖核酸病毒科 (Picornaviridae) 的腸病毒 (Enterovirus)，其直徑為 20~30nm。
2.血清學診斷：
血清學診斷方法有病毒中和試驗，螢光抗體法，雞胚感受性試驗，免疫擴散法及免疫酵素吸附法 (ELISA)。
病毒中和試驗係取懷疑感染 AE 的雞血清與 AE 病毒株感作係以雞胚胎蛋接種試驗之 ( 見附錄 1)。螢光抗體法 (FA) 則可從被感染 AE 的組織中檢出 AE 病毒抗原，常取的病材組織為腦、胰臟及腺胃組織。雞胚感受性試驗係為了判定某種雞群AE感受性或免疫狀態而發展之試驗方法，其施行方法見附錄 2。當有多量的測試血清時，可使用免疫擴散法及免疫酵素吸法，免疫擴散法之施行方法見附錄 3，酵素免疫吸附試驗 (ELISA) 之診斷套組目前已有市售，可以依發病雞群及未發病群的抗體測定結果判定雞群是否有感染。
3.病理學診斷：
組織切片下：中樞神經系統之大型運動神經細胞呈中心性色質小體溶解 (Central chromatolysis)、淋巴球圍管、及腺胃及肌胃之肌肉層有淋巴球呈濾胞樣聚等病變，再配合免疫化學染色法，於神經細胞質內染出病毒抗原。
(六)確診依據
依據臨床上小雞癱瘓、運動失調等症狀，配合病理組織學上大型神經細胞中心性色質融解病變，再配合免疫化學染色法於神經細胞質內染出病毒抗原，以及病毒的分離為確診之依據
(七)參考文獻
1.Braune, M. O., and R. F. Gentry. Avian encephalomyelitis virus. Ⅱ. Pathogenesis in chickens.Avian Dis.15：648-653.1971.
2.Butterfield,W.K.,R.E.Luginbuhl,and C.F.Helmboldt.Characterization of avian encephalomyelitis virus(an avian enterovirus). Avian Dis.13：363-378.1969.
3.Calnek, B. W., and J. H. Jehnich. Avian encephalomyelitis studies. Annu.Rept.Mass. Agric.Exp.Sta.,Univ.Mass.Bull.No.509-62.University of Massachusetts, Amherst, Mass.1957.
4.Helmboldt, C. F. Histopthologic differentiation of disease of the nervous system of the domestic fowl(Gallus gallus).Avian Dis 16：229-240.1972.
5.Jungherr, E. L., and E. L. Minard. The pathology of experimental avian pneumoencephalitis.Am.J.Vet.Res.5：125-134.1944.
6.Sato, G., M. Kamada, T. Miyamae,and S. Miura.Propagation of non-egg-adapted avian encephalomyelitis virus in chick embryo brain cell cultrus. Avian Dia.15：326-333.1971.
7.SumNer, F. W., R. E. Luginbuhl, and E. L. Jungherr. Studies on avian encephalomyelitis. Ⅱ. Flock survey for embryo susceptibility to the virus. Am. J. Vet. Res.18：720-723.1957.
8.van der Heide,L.The fluorescent antibody technique in the diagnosis of avian encephalomyelitis. Tech. Bull. No.44. Life Sciences and Agr. Expt. Sta., University of maine, Orono, Maine.1970.
9.Van Rroekel, H., K. L. Bullis, O. S. Flint, and M. K. Clarke. Avian Encephalomyelitis. Mass. Agric. Exp. Stn. Annu. Rept. Bull. No.388. University of Massachusetts. Amherst, Mass.1942.
(八)附錄
附錄1：
AE中和試驗
病 毒：使用雞胚馴化株 (Van Roekel straiu)
雞 胚：用 6 日齡 SPF 雞胚。
實施方法：病毒 10 倍階段稀釋列病毒液加等量之被檢血清，放室溫 30 分鐘，各稀釋液接種數個雞胚卵黃囊內 0.1ml，再培育後於 18 日齡時破開檢查病毒感染雞胚的特徵病變，與病毒稀釋列與稀釋液之等量混合物接種的病毒對照的接種雞胚組之間的病毒感染後的對數差，計算中和指數，中和指數 1.1 以上為中和抗體陽性。
附錄2：
雞胚感受性試驗1 雞群取 30 個以上的 5~8 日齡發育雞胚的卵黃囊內接種 100EID50 或以上的雞胚馴化株病毒 (Van Roekel 株 )，在 18 日齡時破開檢查雞胚的感染 ( 發病 )，與非感染 ( 非發病 ) 的差率作為種雞群的免疫率。50% 以下為免疫群。如略高於 50% 亦算為免疫群。
附錄3：
AE 免疫擴散法 (AGP) AGP 抗原：以 AE 病毒 Van Roekel 株感染雞胚腦精製濃縮抗原，反應使用 4 單位抗原。陽性血清：以 SPF 成雞 (10 週齡以上 ) 口服接種 AE 病毒 Van Roekel 株之免疫血清，中和抗體價須 1000 倍以上。陰性血清：未接種之 SPF 成雞血清。Agar gel 泡製：0.9~1.0w/v%Agar 加 12~15w/v% 氯化鈉溶於 PBS 或 Veronal Buffer，加上適當量的防腐劑，加熱溶解。26×76mm 玻片 (Slide glass) 加入 5ml 泡製好的 Agan gel，凝固後打洞直徑 3mm 孔，中央一孔，周圍 6 孔。施行方法： 將 AE 抗原放入中央孔，周圍孔放入測試血管，在室溫放置 48~72 小時反應後，判讀有無沈降線產生，抗原與陽性血清之間應有特異沈降線產生。