廿八、雞產蛋下降症候群1976
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(一)病名及病原
1.病名：雞產蛋下降症候群 1976(Egg Drop Syndrome 1976；EDS-76)
2.病原：係由家禽腺病毒 (adenoviruses) 所引起。EDS-76 病毒廣佈於水禽及家鴨、家鵝和雞。
(二)疾病簡介
EDS-76 係以產生褪色蛋、軟殼蛋及無殼蛋，以又產蛋率降低為特徵的疾病。感染雞在進入產蛋開始期時會開始排毒，此時雞群發病的情形，視雞群中獲得免疫雞的比例而定。在一群中，如免疫雞只有少數時，雞群中會爆發性發病，而出現典型產蛋下降症候群，但如雞群中有 5-50% 的雞具有抗體時，雞群對感染已具有抵抗性，其感染後之傳播較為緩慢，症狀亦較輕，產蛋率亦僅少許下降。 本病之主要傳播路徑為介蛋傳播，尤其種雞在發病期間所生的種蛋，有高度的介蛋感染率。肉種雞群以 25-35 週齡之種雞所生的種蛋感染率最高。水平感染極少發生，普通如管理良好的話，不太會在飼育場傳播。本病可分三型。第一型為傳統型 (classical form)，可感染母雞及可垂直傳播，此型病毒一直潛伏在體內直到雞隻開始產蛋才活化起來，而造成特徵性症狀。第二型為地方型 (endemic form)，是從傳統型衍化而來的，病毒主要經由共同集蛋場散佈到蛋雞群。第三型是散發型 (sporadic form)，此型經由野生或人工飼養的水禽污染飲水而造成禽群之感染，此型可引起傳統型 ( 如種禽被感染時 ) 或地方型。因潛伏感染 EDS-76 病毒的再活化而爆發本病的雞群，通常發生在 35 週齡前。但所有年齡雞皆具有感受性，因此若 EDS-76 病毒(經由飲水污染水源等述徑而感染時，則任何年齡的雞均可被感染。
(三)典型之臨床症狀及病理變化
EDS-76 通常由於雞群突然的產蛋降低、產下褪色蛋、薄殼蛋、軟殼蛋或無殼蛋而發現有本病的發生。在本省發生者常伴有下痢或排出綠色下痢便，但並無呼吸症狀及死亡情形。此產蛋率之降低及異常蛋的產生約持續 4-10 周。其中產蛋率降低由少數至 50%。一般種雞在進入雞蛋生產高峰時發生本病，亦即多發生於 25-35 週齡蛋雞或種雞，產蛋率降低 6-25%，破蛋數異常增加，蛋重減少。
本病在肉眼上並無顯著病變，但產蛋停止或生產異常蛋殼的雞，有輸卵管萎縮的現象。感染 3 日後輸卵管漏斗部之黏膜及皺壁有水腫性腫大，然後子宮部變為鬆弛，黏膜的水膜亦較明顯 (12 日 )，尤其在感染後 14-16 日的子宮黏膜皺壁的水腫更為顯著，內部可見白色滲出物。脾也會腫大，白色域增加，呈赤白斑紋。又在產蛋停止或產出軟殼蛋及無殼蛋時期的病雞的卵巢有卵胞軟化不成型、或卵黃變色融解、出血卵胞等，也會有軟殼蛋或無殼蛋墜落腹腔，以致發生腹膜炎者。
(四)應採病材
雖然自一隻臨床上沒有症狀，且病毒出現期間短的感染雞，欲分離病毒可能是很難的，但 EDS-76 病毒主要在子宮的卵殼腺分泌后增殖。分離病毒的最好方法是在可疑雞群中撿取感染蛋給無抗體的母雞吃，其後一旦該母雞生產了褪色蛋殼、薄殼或無殼之蛋時，再將該母雞殺掉，取卵殼腺分泌區的組織進行組織免疫化學染色檢查或病毒分離。但此法繁複，通常係採取病雞之糞便或泄殖腔拭子進行病分離，或是採取血清以血清學方法來檢測雞群是否曾感染。
(五)綜合診斷
1.病原分離與同定
(1)細胞培養分離 EDS-76 病毒之分離以使用來自鴨或鵝的胚胎肝細胞，胚胎腎細胞較佳，病毒對胚纖維芽細胞較不敏感。細胞培養一定要有無接種的對照，並且接種病材的細胞必須至少進行 2 次盲目繼代，以檢查任何可能潛汱的病毒。為了完成盲目繼代，對照組的細胞要保留到開始老化為止。繼代時細胞冷凍溶解使之崩解，收集上清液，然後接種 2-4 瓶細胞。盲目繼代後，若仍無細胞病變，此培養可被認為無病毒。雖然雞胚肝細胞或小雞腎細胞稍可用來取代鴨胚細胞，但是最好用鴨胚細胞來分離 EDS-76 的病毒，用雛雞的細胞分離病毒至少需要經過 5 次以上的盲目繼代。雖然病毒分離不易，但是 EDS-76 病毒易發生交叉污染，因此對照組必須與病材組同時繼代。EDS-76 病毒會造成細胞圓化變形並使自培養瓶表面脫離。EDS-76 病毒可凝集禽類紅血球，但不會凝集哺乳類的紅血球。接種病材後 3-5 天的變性細胞，上清液應該以雞的紅血球進行血球凝集性檢查。最好再間接免疫螢光法(附錄1)染色以確定病毒生長與否。
(2)胚胎分離 用雞胚無法分離 EDS-76 病毒，而必需使用鴨胚或鵝胚。EDS-76 病毒接種到鴨胚或鵝胚的尿囊腔 (allantoic cavity)，可以產生很高的血球凝集力價 (1/16,000-1/32,000)，但在雞胚中則不會產生血球凝集或造成死亡。
(3)電子顯微鏡負染色檢查 以電子顯微鏡負染色檢查的特點是速度快，而且可以確知病毒之外是否同時存在其它微生物。腺病毒通常容易以其形態來辨認，它大約有 75nm 大小，有 12 個突出點和 20 個三角面。變性的病毒顆粒會變成環狀。與腺病毒關聯之小病毒 (Adeno-associated parvoviruses) 亦常同時被發現，它們的直徑約為 22±3nm 的圓形顆粒，與 picornavirus 不同。Piconavirus 不具特有的形態，且直徑為 28±3nm。若有需要，使用免疫電子顯微鏡之檢查方法更為敏感，不管使用的血清是抗血清或來自對一般腺病毒有感受性雞群的血清。
(4)細胞染色檢查 假如電子顯微鏡或免疫螢光法都無法鑑定，則可將接種的細胞用普通 H&E 染色檢查核內包涵體。感染早期，包涵體的染色和大小變異大，但所有腺病毒株最後都會形成大的嗜鹼性包涵體。
2.血清學診斷
(1)血球凝集抑制 (HI) 試驗
EDS-76 病毒具血球凝集性，其病毒中和試驗方法可用來確定血球凝集抑制 (HI) 抗體的存在。終點價可利用上清液中血球凝集素的出現，或血球吸附作用的方法來判定。鳥類除非感染了此病毒，否則不會有 HI 抗體產生。EDS 之微量 HI 試驗方法如附錄 2。
(2)其他血清學診斷方法如 ELISA，血清中和試驗 (SN)，螢光抗體法 (FA)，及免疫擴散法 (DID) 等方法與 HI 試驗之敏感性相。但 ELISA，FA，及 DID 無法區別 EDS-76 病毒與其他腺病毒之感染。而中和試驗一般僅用於證實不尋常的HI試驗結果 ( 實施撲滅計畫時 )，或用於證實在新的動物種別測定之 HI 抗體。亦即於診斷 EDS-76 時，第一優先考慮應用之血清學診斷試驗為 HI 試驗。
3.病理學診斷
儘管有其他複雜的原因，但 EDS-76 的病徵是很容易診斷的。如雞產薄殼蛋、軟殼蛋及無殼蛋，大便稍帶綠色，並附有由子宮排出黏稠偶見附有血之黏液。再仔細檢查時，可見在子宮有嚴重之發炎情形，即子宮黏膜充血、水腫。不正常蛋的出現同時併有產蛋率下降的情況。若病毒的垂直傳染，則大約在產蛋的同時有狀皆會發生。組織病理學檢查可見子宮變性之上皮細胞內含有核內包涵體、上皮細胞增生、管狀腺萎縮，及固有層有淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞及少數異嗜球之浸潤。
(六)確診依據
如果沒有前軀症狀而突然發生異常蛋及破蛋之增加，而在輸卵管之漏斗部與子宮部有顯著的炎症變化時，可診斷為本病。本病在雞群內傳播緩慢，所以 EDS-76 抗體要在 EDS-76 症狀呈現後才出現，一般 HI 抗體在 64-1024 倍。
(七)參考文獻
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(八)附錄
附錄1.間接免疫螢光抗體法
(1)以丙酮 (acetone) 固定感染細胞 5 分鐘。
(2)加經稀釋的抗血清，並在 37℃ 感作 30 分鐘。
(3)以磷酸鹽緩衝生理鹽水 (PBS) 洗 2 次以上。
(4)加入經稀釋的抗種別之第二螢光標示抗體，並於 37℃ 感作 30 分鐘。
(5)以 PBS 洗至少 2 次。
(6)加甘油生理鹽水，鏡檢。 註：應注意使用適當濃度的 EDS-76 病毒抗血清及抗種別之第二螢光標示抗體。第二螢光標示抗體的濃度，依廠商所建議的稀釋倍數通常就能得到滿意的結果。決定 EDS-76 病毒抗血清的濃度的方法是將抗血清逐步雙倍稀釋，然後加到已知 EDS-76 病毒感染的緣胞中，再以螢光顯微鏡決定最高稀釋倍數的血清。通常使用比終點濃度大 4 倍的血清量。
附錄2.血球凝集抑制 (HI) 試驗
(1)紅血球凝集(HA)反應 Ⅰ 紅血球浮游液之製備
HA 反應係使用 0.8% 紅血球浮游液，其製備方法先取 Alsver 液欲採血液 1/4 量於注紙器內，由雞之翼靜脈採血防止凝血後收於容器內。Alsver 抗凝血如為無菌，在 4℃ 保存可使用 1 週之久。該抗凝血約加 5 倍生理食鹽液，以 2-3 層紗布過濾，再以 2000rpm，5 分鐘反覆洗滌 2 次，再以生理食鹽液還原為原量後，以 1500rpm 遠心 10 分鐘，此沈渣血球以生理食鹽液再浮遊為 0.8% 紅血球濃度。該 0.8% 紅血球浮遊液如保存於冰箱 3 日內尚能使用，但已溶血者則不宜使用。 Ⅱ 抗原使用量測定(2)血球凝集抑制 (HI) 試驗
HI價為阻止血液凝集之血清最高稀釋倍數，但需注意
a.血清對照孔應無血球凝集現象。
b.抗原使用量檢定結果應證明使用量正確。