廿九、傳染性喉頭氣管炎
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(一)病名及病原
1.病名：傳染性喉頭氣管炎 (Infectious laryngotracheitis，簡稱 ILT)。
2.病原：是由α疱疹病毒科 (Alphaherpesviridae) 之疱疹病毒 (Gallid herpesvirus 1) 所引起。
(二)疾病簡介
本病主要在雞引起的一種急性傳染病，和雞養在一起之雉雞也有發病的報告，感染雞可見流鼻水、囉音、咳血、喘息、開口呼吸；重症者呼吸極度困難，並咳出含血液的分泌物；溫和型感染病雞，只生長遲緩、產蛋下降、結膜炎、眼淚增多、眼窩下竇腫大及持續流鼻水；死亡率嚴重者可達 5% 以上。
歐、美、澳洲等地區都有本病發生，本省於 1979 年在岡山地區首度被證實有本病之爆發，隨即散佈至全省各地，目前仍有散發性病例。
(三)典型之臨床症狀及病理變化
本病有相當的年齡抵抗性，年齡愈大的雞感染症狀較嚴重，因此本病在本省白肉雞很少發生，常發生在有色肉雞、蛋雞和種雞，而臨床症狀的嚴重程度除和感染的病毒株毒力有關係之外，受緊迫因素的影響也很，諸如天候、其他疾病之共同感染以及經營管理之不當等，其中天候之影響較明顯的是寒流，日夜溫差大，霧氣溼氣多；管理不當的緊迫以及過度密飼以至雞舍內氨氣較重，和雞舍太過靠近馬路經常太過於吵雜等都容易使病情加重。
急性型的臨床病狀流鼻水、濕性囉音、咳嗽、喘息隨後呼吸困難、開口呼吸、咳出帶血黏液等，死亡率可達 5~70%( 平均 10~20%)，溫和型則會生長遲緩"產蛋下降、眼淚增多、結膜炎、眼窩下竇腫大、持續流鼻水，發病率低於 5%，病程 1~4 週。
解剖病變主要在氣管喉頭的炎症反應，由早期的黏液增加到末期的出血壞死，炎症可擴展到支氣管和肺，結膜和眼窩下竇之充血水腫，慢性病例氣管黏膜可見由脫落上皮和炎症滲出液形成之偽膜，病理切片在玖管黏膜上皮細胞或肺支氣管上皮細胞有核內包涵體。
(四)應採病材
採氣管及肺保存於輸送液中 (50% 甘油緩衝液，pH7.0~7.4，含1000IU/ml 青黴素及 100μg/ml 鏈黴素 ) 以水塊置於可以保溫之隔熱箱中，24 小時內送達實驗室，無法馬上分離時，要將病材存於 -70℃ 以下的冰櫃中，未冰凍的組織中病毒 2 天就完全死亡。
(五)綜合診斷
1.病原分離同定：
病材磨碎後以 M199 培養基作成 5~10 倍乳劑，經 1000xg 離心 10 分鐘，其上清液接種雞胚腎細胞培養或雞胚胎絨毛尿囊膜 (CAM) 培養。 接種方法及步驟：
(1)雞胚胎腎細胞：取 18~20 日齡雞胚胎以 trypsin 消化，調節細胞成 0.5×105cells/ml。置入 24 孔培養盤中，以 M199 培養液加 1M HEPES 及 10% 胎牛血清，待 2~3 天細胞長滿後接種病材分離，一代即可見細胞融合的變性 (CPE)。
(2)雞胚絨毛尿囊膜培養：選取無 ILT 抗體雞胚胎 9~12 天，在氣室及蛋身中央無血管處以碘酒及 70% 酒精消毒，以大頭針在蛋殼上各鑽一小洞並挑破殼膜，注意不可刺破絨毛尿囊膜。用橡皮帽於氣室孔洞處吸氣，使蛋身中央孔洞部位造成人工氣室。病材液由人工氣室滴入絨毛尿囊膜上 0.1cc，一病材接種五個蛋。輕輕轉動雞胚胎使病材液均勻分佈在膜上，以石臘封住洞口，置 37℃ 孵蛋箱中培養，3 天後打開蛋殼觀察斑點形成。
(3) 鑑定：雞胚胎於接種後 2 至 8 天死亡，形成斑點的絨毛尿囊膜及肝臟可固定於 Bouin 氏液中 1 天，移至 70% 酒精及行石臘切片 H&E 染色，檢查融合細胞，局部壞死及嗜酸性核內包含體。組織均質或上清液負染色行電子顯微鏡觀查，可見典型的泡疹病毒。2.血清學檢查： 免疫擴散法：以高度免疫血清與肺、氣管均質上清液置於 1.5% 洋菜 ( 含 8%NaCl，Veronal 緩衝液 pH7.2) 小孔洞中進行免疫擴散法，若可形成1或多條的沉澱線，即可證實抗原的存在，但此法因抗原必須在一定量以上才可偵測得到，故需同時進行病毒分離。免疫擴散法亦可用於抗體的測定，抗原可由感染胚胎的 CAN 製得，但其測定抗體的敏感度較低，僅適於整群的偵測而已。
血清中和試驗：病毒的偵測可以用雞胚胎或細胞培養，有些毒株或疫苗可引起雞胚腎細胞變性 (CPE)，用 100TCID50 病毒量，行β法最為正確迅速，進行和和反應與一般進行方法相同。血清先於 56℃ 下不活化 30 分鐘。 0.05ml 2 倍稀釋血清置入微平板小孔，0.05ml 含 100TCID50 病毒液接種入每一稀釋血清中，在 37℃ 作用 1 小時，加入 0.05ml 消化好的細胞 (5×105cells/ml) 培養 4 天，觀察 CPE 的形成，記錄 50% 的力價終點。
另有敏感度更高的酵素免疫吸附法 (ELISA)，可同時測定大量的檢品，有商品化的測定盒附有操作說明，操作簡易，可供群體測定。3.病理學檢查：
氣管黏膜抹片檢查：
儘量避免血液及滲出的污染刮下咽部或氣管上皮，置於乾淨玻片上，用另一玻片覆蓋平行拉開空氣或火焰烘乾後，置於甲醇溶液中 3 至 5 分鐘固定，用 giemsa 染色液 (1 ml 蒸餾水日 1 滴 giemsa 原液 ) 於 37℃ 中染 2 小時，或室溫隔夜，以水清洗染色片，急速浸入甲醇中 3 至 5 次使玻片呈洋紅色，玻片再以清水洗淨，於空氣中風乾後鏡檢；核內包含體在感染早期可以看到，為紫色附於粉紅色上，外圍以環狀空間。
快速切片檢查：
氣管組織小塊先固定於固定液中 ( 由 75ml 95% 酒精加飽和苦味酸，15ml 福馬林及 5ml lμ/冰醋酸 ) 於 56℃ 中固定 30 分鐘，用絕對酒精脫水 2 次 (56℃) 共 20 分鐘，用二甲苯處理 2 次 (56℃) 共 30 分鐘，於 58℃ 中滲臘 20 分鐘後包埋，於切片機中切成 6μ 厚度切片，以白蛋白粘於玻片上並用微溫烘乾 20 分鐘，將切片通過二甲苯、酒精，並以 H&E 染色、脫水清色以蓋玻片覆蓋，於鏡下觀察核內包含體，包含體於感染後 2 天至上皮脫落 ( 約 4 天 ) 可以檢查到。目前常用福馬林固定石臘切片 H&E 染色方法亦可檢查氣管中的包含體，唯應同時切 5 隻以上儘是感染初期的病材，才可得到較正確的診斷。
參考文獻
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