卅一、家禽流行性感冒
- 內容
(一)病名及病原
1.病名：家禽流行性感冒 (Avian Influenza，簡稱 AI)。
2.病原：是由 A 型流行性感冒病毒所引起多種禽類之感染。以前所稱之「雞瘟」於 1981 年的世界家禽流行性感冒會議已建議，不再使用雞瘟這個稱呼，而改稱「強毒型家禽流行性感冒」。
(二)疾病簡介
家禽流行性感冒是由 A 型流行性感冒病毒所引起多種禽類之感染，不過只在雞和火雞引起較嚴重的經濟損失，本病毒由其封套上的二種抗原，血球凝集抗原 (hemagglutinin，H 抗原 ) 及神經胺
抗原 (neuraminidase，N 抗原 ) 之不同而有極多種血清亞型，目前已知有 14 種 H 抗原亞型 (H1-H14) 及 9 種 N 抗原亞型 (N1-N9)，至今曾引起急性臨床疾病 ( 以前稱之為雞瘟 ) 的高毒力病毒僅有 H5 和 H7 亞型，不過有許多 H5 和 H7 亞型的分離株並不一定具毒力。由雞的年齡種別之不同及環境因素的差異，高致病力毒株引起之臨床所見差異也大，有在還見不到症狀即有突然死亡，也有時見到典型的呼吸症狀，過度流淚、鼻竇炎、頭水腫、無毛區皮膚發紺及下痢。
(三)典型之臨床症狀及病理變化
臨床症狀變異極大，受很多因素影響，可能出現呼吸系統、消化系統、生殖系統或神經系統的症狀，主要的症狀活力減低、食欲減退、消瘦、母雞賴孵、產蛋率下降；呼吸系統症狀變異也大，可能咳嗽、流鼻水、囉音及過度流淚；病禽喜擠在一起，羽毛蓬鬆，頭臉水腫無毛區皮膚明顯發紺，神經症狀，下痢等，前述症狀可能單獨發生或多項同時出現。
以美國賓州 H5N2 強毒爆發的蛋雞病例，剛開始是急性呼吸症狀，隨之死亡率增高，產蛋率下降，不過在其轉為更強毒力之後，死亡率升到 50%~89%，極明顯食欲降低，飲水量減少，產蛋率明顯下降，此時呼吸症狀反而不是很明顯，蛋雞群精神嚴重沉鬱、震顫、頭頸扭曲。
解剖病變也是變異很大，大部分病例都是溫和型，又以雞、火雞較常見，其主要所見是鼻竇之炎症，呈卡他性纖維素性，粘稠到乾酪樣之病變，氣管黏膜也是由卡他性至乾酪樣炎症滲出物，氣囊增厚混濁帶纖維素性到乾酪樣炎症滲出物，纖維素性腹膜炎，卡也性至纖維素性之腸炎、輸卵管炎等。
強毒型因迅速死亡，常無明顯病變，不過可能可看到充血、出血、水腫、壞死等病變，如頭部鼻竇水腫，肉垂雞冠之發紺、充出血，有時腿部也有充出血，在肝、脾、腎、肺等臟器有壞死區，腺胃與肌胃交界處之黏膜出血。
(四)應採病材
由死雞採材需包括棉棒口鼻拭子、肺、氣囊、腸道、脾、腦、肝和心，由同一隻雞所取的之各材料可單獨或混在一起作成乳劑。
由活雞採材，則以棉棒口鼻拭子或肛門拭子，如雞隻還小也可採取新鮮糞便。(五)綜合診斷
1.病原分離固定：
上述材料欲作成乳劑，以磷酸緩衝液 (PBS)pH7.0~7.4，並含 penicillin(2000 單位 /ml)，streptomycin(2mg/ml)，gentamicin(50μg/ml) 及 mycostatin(1000 單位 /ml) 用於臟器乳劑，如用於糞便則抗生素量可酌予提高五倍。須注意的是抗生素加後的 PBS 其 pH 應再調到 7.0~7.4。糞便或臟器研磨碎，以上述 PBS 稀釋成 5~10 倍乳劑於室溫 1~2 小時冰箱內 24 小時，後以 1000xg 離心，取上清液用尿腔接種法接種 9~11 日齡 SPF 雞胚胎，至少 5 個，後置於 37℃ 孵蛋箱 4~7 日，在接種 24 小時以後死亡或到第 7 天仍未死之雞胎置 4℃ 冰冷後，採集其尿囊液，並與 5% 雞紅血球滴在玻璃板上作，測定其是否具血球凝集性 (HA)，HA 陰性的尿囊液至少要以前述方法再繼代一次。
HA 陽性者，應採集其尿囊液和漿尿膜，後者以均質機研碎以緩衝液作成 5 倍乳劑，經超音波細胞擊碎器充分擊碎後 1000g 10 分鐘離心，其上清液即為可溶性抗原。另尿囊液可以添加 1.0M 之 HC1 使其成為 pH4.0 後置冰箱，一小時後以 1000g 在 4℃ 離心 10 分鐘棄上清液，而其沉澱物以含 0.5M glycine 習 1% sodium lauroyl sarcosinate 緩衝液 pH9.0 適量懸浮，懸浮液或前述漿尿膜之可溶性抗原可作為免疫擴散法之抗原與已知血清及已知之家禽流行性感冒抗原進行免疫擴散法測定，如有一致性之沉降線出現，即可確認所分離之病毒為家禽流行性感冒病毒 (AIV)，進行免疫擴散法測定時在 AI 已知抗體旁應有一孔加新城雞瘟已知抗體，此抗體與欲測抗原不應有沉降線出現。
濃縮的尿囊液也可以經負染色後在電子顯微鏡下觀察病毒顆粒予以確認。確認為 AIV 後，血清亞型之測定，可以在山羊製備之 H 或 N 亞型抗血清進行 HI 或 NI tests 予亞型之鑑定，如有必要將病毒分離株送 OIE 之指定實驗室 Central Veterinary Laboratory Weybridge，Surrey，UK 進行鑑定。 雞瘟之確認： 傳統「雞瘟」目前已稱之為強毒型家禽流行性感冒，通常指雞有下列臨床症狀，諸如，嚴重的流淚、呼吸困難、鼻竇炎、頭臉水腫、無毛處皮膚發紺 下痢，有可能只是突然死亡，欲些症狀可能因雞齡、有否混合感染及環境因素等而有很大差異。有時溫和型的AIV也有能因特殊狀況而變成強毒型之臨床表現。因此第一屆國際家禽流行性感冒研討會作成結論要確認強毒型AIV需有下列三項實驗：
A.將分離株之尿囊液稀釋 10 倍以靜脈接種 8 隻 4~8 週齡無 AI 抗體之雞隻，每隻接種 0.2ml，在觀察 10 天期間如有 6 隻以上死亡，即為強毒株。
B.如分離株只在上述實驗殺死 1~5 隻接種雞隻，而其血清亞型又 H5 或 H7 時，需將分離標作細胞培養，如在沒添加胰蛋白(trypsin)時，仍能有CPE( 細胞病變 ) 或形成 plaque，則可能為強毒型，如無 CPE 或不形成 plaque 則不是強毒株。
C.所有低致病力的 H5 和 H7 亞型及其他亞型分離株，如能在細胞培養無添加 trypsin 情況下產生 CPE，則病毒上與血球凝集素 (hemagglutinin) 相關連之胜的氨基酸必須定序，如其氨基酸順序與強毒型 AI(HPAI) 病毒株相似，則該分離株將被認為是強毒株。
雖然有很多的 H5 和 H7 亞型 AIV 致病力弱，但所有曾經引起重大疫情的強毒株 AIV 均具有 H5 和 H7 亞型之血球凝集素 (HA 抗原 ) ，致病力強弱與 HA 抗原分裂部位 ( 即 HA 抗原分裂成 HA1 與 HA2) 的氨基酸序列有關，所以強毒株該氨基酸序列參考，可以比對那些低毒力株是否可能因某一簡單的突變，即變為強毒株，可以作預測。
2.血清學試驗：
(1)免疫擴散法：本法乃利用所有A型AIV的各血清亞型，皆具有相同的核蛋白衣 (nucleocapsid) 抗原及 matrix 抗原，來測定家禽 ( 雞、鴨、鵝、火雞、鳥等 ) 是否感染 AIV 而帶有抗體。本法抗原的製備可使用任何一種亞型的 AIV 以尿腔接種 9~11 日齡雞胚胎於 37℃ 培養 3~5 天後採取感染的漿尿膜 (CAM) 以均質機研碎，用磷酸緩衝液製成五倍乳劑，急速凍結融解三次 ( 或以超音波擊碎機充分擊碎細胞 ) 再經 1000g 離心 10 分鐘，其上清液添加福馬林使其濃度達 0.1%，即為本法之抗原，可分裝儲存於 20℃ 冷凍櫃備用。
本法之進行，可加 1% 之 agar 於 8% 之食鹽溶液經高壓滅菌後，每一平皿直徑 9 公分 ) 倒入 15~20ml，待完全凝固後，挖取中央一洞周圍六洞，每洞直徑 0.5 公分，周圍與中央洞距 0.5 公分，每洞滴入 50μ1 之抗原或血清，每個欲測血清旁至少有一個已知陽性之血清，與陽性血清形成連續一致之沉降線者，是為具有 AI 抗體。(2)血球斿集 (AH) 與血球凝集抑制 (HI)test：比照新城雞瘟之方式操作。唯有些雞以外的禽類血清對雞以外的禽類血清對雞的紅血球有非特異性的凝集作用，此種血清可先以雞紅血球吸附，亦即血清添加雞紅血球混合均勻置室溫一小時後 1000g 離心 5 分鐘，取上清液為供試血清。也可以何種禽類血清就用該種禽類紅血球進行 HA 或 HI 試驗即無問題。
參考文獻
1.Acland, H.M. et al (1984). Lesions in broiler and layer chickens in an outbreak of highly pathogenic avian influenza virus of infection. Vet. Pathol 21：564-569.
2.Alexander of the pathogenicity of eight avian influenza A viruses of H5 subtype for chickens, turkeys, ducks, and quail. Avian pathol. 15：647-662
3.Beard, C. W. (1970). Avian influenza antibody detection by immunodiffusion. Bull. WHO 42：199.
4.Calnek B. W. et al (1991). Diseases of Poultry 9th ed., Wolfe Publishing Ltd.
5.Eckroade, R. J. & L. A. Silverman-Bachin (1987). Avian influenza in Pennsylvania. Proc. 2nd Int. Symp. Avian Influenza, pp.22-32.
6.Murphy, B. R. & R. G. Webster. (1985). Influenza viruses. In B. Fields (ed.) Virology, pp.1140-1179. Raven Press, New York.
7.Proceedings lst international symposium on Avian Influenza. (1981). Carter Comp. Corp., Richmond VA.