豬生殖及呼吸症候群 (2)
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一、 病歷: 本省北部某民間豬場,在養頭數 25,000 頭,自民國 80 年 6 月至 81 年 10 月間,發現許多豬隻皮毛粗糙、精神萎靡、厭食、眼瞼分泌物增加(圖 1),常併發二次性感染,導致嚴重胸膜炎、肺炎、腹膜炎、結膜炎、關節炎或下痢而逐漸消瘦死亡。主要發生於分娩後 10 日齡以上豬隻,而 40 至 50 日齡之保育豬隻尤其嚴重,發病率佔同年齡層豬隻的 25~60%。而整體肉豬平均死亡率約 5~18% 之間,發病至死亡約 14~21天。 二、 組織病理學檢查: 發病豬隻普遍併發嚴重混合型肺炎,肺實質變硬並呈暗紅或灰色,其它肉眼病變如多發性漿膜炎、胸膜炎、腹膜炎、腦膜炎或腸炎亦散發其中。組織切片下肺臟病變以間質性肺炎為主(圖 2),肺泡壁增厚並有中等量單核炎症細胞和少量嗜中性球的浸潤,並常併發支氣管周圍炎及化膿性支氣管肺炎,其它病變尚包括胸腺萎縮、淋巴結和脾臟淋巴小結空虛化等。 三、 病毒分離: 病豬肺、脾及扁桃腺應用 RK-13,PK-15 繼代細胞及初代豬腎細胞培養病毒均呈陰性。然而以無特定病原豬之肺泡巨噬細胞培養,則共33頭送檢病材中,有 19 頭 (58%) 於接種36 小時後開始呈現細胞病變作用 (CPE),72 小時後細胞則完全壞死。 四、 肺泡巨噬細胞超顯微病理變化: 主要造成細胞質之空泡化及粒腺體腫脹,並於空泡之內質網和細胞質內可見許多 40~80nm 大小,具封套之疑似病毒顆粗 (圖 3)。而此病毒顆粒並未於核內發現。 五、 電子顯微鏡免疫膠體金標示抗體診斷: 具 CPE 肺泡巨噬細胞培養液經與豬抗 ATCC VR-2332 PRRS 病毒多源抗體作用後 ,再與蛋白 A-膠體金作用後,於電子顯微鏡下可見膠體金標示之病毒顆粒,大小約 70nm。 六、 螢光標示抗體檢查: 接種病材乳劑之肺泡巨噬細胞與豬瘟及豬假性狂犬病螢光標示抗體作用後均呈陰性反應,但與 ATCC VR-2332 PRRS 病毒螢光標示抗體作用則呈陽性反應,於具 CPE 肺泡巨噬細胞,經抗 ATCC VR-2332 PRRS 病毒核衣蛋白之螢光標示單株抗體確認,結果發現其細胞質內呈陽性反應。 七、 ABC 免疫染色結果: 感染豬隻的肺臟切片,經 ABC 免疫染色後,在變性腫脹之巨噬細胞的細胞質中發現棕色陽性反應(圖 4)。在脾臟亦可發現棕色陽性反應,且大多位於中央動脈周圍淋巴組織附近之變性腫脹的巨噬細胞細胞質中。 八、 細菌與黴漿菌培養結果: 由 33 頭發病豬肺臟中亦分離出沙門氏桿菌 (9/33)、巴氏桿菌 (7/33)、鏈球菌 (5 /33)、胸膜肺炎放線桿菌 (4/33)、大腸桿菌 (7/33) 和黴漿菌 (4/33) 等。 九、 診斷: 豬生殖與呼吸症候群。(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome)
十、 討論: 病豬肺、脾和扁桃腺研磨乳液接種細胞後造成豬肺泡巨噬細胞之病變作用,螢光抗體反應的位置,病毒之形態與大小等各項特徵,與荷蘭所分離出來之 Lelystad 病毒和美加所分離出來之病毒株均極為類似,最後並經抗 ATCC VR-2332 病毒核衣蛋白 (SDOW 17) 標示單株抗體確認,因此可確定本省已遭受豬生殖與呼吸道症候群病毒之侵襲。
由此豬場之疫情顯示,豬隻多於哺乳期、保育期或肥育前期發病,且多死於二次性之細菌感染。母豬流死產或不孕之情形則少見,此與國外之報告同時發生母豬流產、哺乳及保育豬高死亡率之情形不同。然而經深入追查其他有類似疾病的豬場 ,發現許多豬場於豬隻死亡率持續上升之前半年或一年,母豬流產即有上升之情形。根據國外之報告,絕大多數之豬場遭受本病感染之後,約持續 2-4 個月的損失 ,之後,豬場之業績即可恢復至感染前之水準。然而,在所調查的豬場中,本病卻也造成高死亡率而影響生產成本,其肉豬之死亡率甚至可連續高居不下達一年以上 。根據國外之報告,本病所造成之損失嚴重程度與豬場之管理及潛在之其他病原濃 度有關。從剖檢豬隻之細菌分離情形來看,沙氏桿菌及巴氏桿菌為重要之二次性感染病原。
由免疫螢光染色和電顯結果可知該病毒的複製應位於細胞質和空泡化的內質網內,並經由胞泄作用 (exocytosis) 釋出細胞外感染其他細胞或進入血液循環全身。 本病毒並可造成豬肺泡巨噬細胞嚴重病變作用,在接種後 36 小時即可造成細胞粒腺 體腫脹和內質網空泡化,最後並促使細胞崩解。十一、 文獻探討: 1. Christianson WT, Collins JE, Benfield DA, Harris L, Gorcyca DE, Chladek DW, Morrison RB, Joo HS. Experimental reproduction of swine infertility and respiratory syndrome in pregnant sows. Am J Vet Res 53:485-488, 1992. 2. Collins JE, Benfield DA, Christianson WT, Harris L, Gorcyca DE, Chladek DW, Morrison RB. Swine infertility and respiratory syndrome. Proc Minn Swine Conf Vet 1:200-205, 1991. 3. Collins JE, Benfield DA, Christanson WT, Harris L, Hennings JC, Shaw DP, Goyal SM, McCullough S, Morrison RB, Joo Hs, Gorcyca DE, Chlodek DW. Isolation of swine infertility and resporatiry syndrome virus (ATCC VR-2332) in North American and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic Pigs. J Vet Diagn Invest 4:117-126, 1992. 4. Pol JMA, van Dijk JE, Wensvoort G, Terpstra C. Pathological, ultrastructural, and immunohistochemical changes caused by Lelystad virus in experimentally induced infections of mystery swine disease synonym: porcine epidemic abortion and resporatory syndrome (PEARS). Vet Q 13:137-143, 1991.