| 1. |
病歷問診
| (1) |
有從別的感染牧場引進牛隻。 |
| (2) |
牧場先前疫情的發生。 |
| (3) |
懷孕末期的多發性流產。 |
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| 2. |
臨床檢查
| (1) |
流產。 |
| (2) |
胎衣滯留。 |
| (3) |
非懷孕母牛無其他症狀。 |
| (4) |
公牛的睪丸炎及副睪炎。 |
| (5) |
不孕。 |
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| 3. |
血清學試驗：血清和牛奶
| A. |
篩選試驗
| (1) |
玫瑰苯平板試驗 (Rose Bengal plate test, RBPT) |
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抗原 0.03ml + 血清 0.03ml 混合震盪 4 分鐘後觀察凝集情形，任何的可視反應都被認為是陽性反應。 |
| (2) |
快速平板試驗 (Rapid plate test, RPT) |
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把血清 0.08、0.04、0.02 和 0.01ml 滴於玻璃片上 1*1 平方英吋方形中，再於每滴血清上滴入 0.03ml 抗原，混合搖晃 5-8 分鐘病觀察凝
集情形（任何的可視反應都被認為是陽性反應）。 |
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| b. |
確定試驗
| (1) |
試管凝集試驗 (EDTA 或 2Me 處置)。 |
| (2) |
補體結合試驗 (Complement fixation test) (CFT)，ELISA。 |
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| 4. |
病理解剖
| (1) |
無有意義的診斷。 |
| (2) |
壞死性胎盤炎以及流產胎兒組織的廣泛性炎症反應為特徵。 |
| (3) |
有些器官有肉芽腫樣病灶和局部壞死。 |
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| 5. |
組織病理學觀察
| (1) |
肉芽腫樣病灶。 |
| (2) |
形成”布氏桿菌症結節”(Brucella nodule)。 |
| (3) |
組織免疫染色化學法：細胞內布氏桿菌胞器的觀察。 |
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| 6. |
細菌分離
| (1) |
所有流程都要在無菌操作箱內施行。 |
| (2) |
病材：流產的胎兒組織和胃、小腸和直腸內容物，母牛乳汁、死亡母牛乳房淋巴結和其他淋巴結和惡露，公牛的睪丸和其他相關淋巴結、生殖器官。 |
| (3) |
培養基：選擇性培養基 (agar 7.5g、trypticase soy broth 15g、D.W. 500ml、馬血清 25ml 及選擇性 Brucella 抗生素 1 瓶) biphasic medium (Castaneda medium)。 |
| (4) |
組織培養：淋巴結和臟器添加 PBS 後磨碎，接種後培養於 5-10% CO2、5-7 天。 |
| (5) |
菌落特徵：凸面、圓型、透明、具平滑表面，生長緩慢、革蘭式陰性球狀或短桿狀。 |
| (6) |
鑑定試驗：oxidase 和 urease 試驗以及與單一特異抗血清之凝集試驗皆為陽性。 |
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