傳染性支氣管炎病毒基因特性與選殖之簡介
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傳染性支氣管炎病毒(IBV)屬於冠狀病毒科,病毒顆粒直徑約80 ~ 100 nm,具有封套(envelope)。病毒核酸為 "正" 股RNA,作用如同mRNA ,於複製時經capped及polyadenylated作用構成所謂的巢狀構造(nested set)。核酸的結構共有10個ORF(open reading frame),兩端為leader及non-coding序列,病毒基因經轉譯後可形成三種主要結構蛋白,為核蛋白(N protein)、棘突醣蛋白(S glycoprotein)及膜醣蛋白(M glycoprotein)。棘突醣蛋白於後轉譯(post translation)過程中經蛋白酵素切割成兩個次單位S1和S2,S2前5個胺基酸為裂解訊號序列R-R-F-R-R。在S1序列有兩個高變異的區域,可能為誘發中和作用的抗原決定位其部分位置,以單株抗體方法,可將S醣蛋白定位出8個抗原決定位。
病毒基因之選殖,利用已定序完成的臺灣分離株S1醣蛋白基因之核甘酸序列,設計引子,產物位於S1醣蛋白基因C端三分之二的位置,以此引子進行RT-PCR反應,增幅出片段大小為539 bp的產物,產物與載體pRSET A, B, C進行接合作用,並經轉化作用至勝任細胞(competent cell)內,利用IPTG誘導細胞內質體表現S1基因的蛋白質,結果可表現出一分子量約為27.5 Kd的融和蛋白質,以西方免疫轉漬法(western blotting test)進行試驗,該產物可與兔子抗IB病毒的多源抗血清反應。