第一章 實驗室器材之準備與應用
- 作者
- 詹益波；楊揚輝
- 建立日期
- 96年01月10日
- 更新日期
- 96年01月10日
- 內容
1.1. 一般注意事項
‧ 在實驗室內工作時應穿著乾淨的實驗衣，離室則更換之。 ‧ 實驗前後無菌室內應點亮殺菌燈曝曬殺菌，如未設置殺菌燈，應以消毒藥液噴灑實驗台及其周圍。 ‧ 工作中應戴口罩且不可隨便談話，亦不可吸煙及飲食。 ‧ 注意清潔及整理，試藥、培養基、溶液類等均應明確記載其內容、名稱及日期，實驗結果亦應專冊詳細記錄。 ‧ 恆溫器及冰箱應隨手關閉，實驗完畢之物品需經消毒或滅菌處理，不可棄置於恆溫及冰箱內。 ‧ 儀器及器具之使用應遵守正確之使用方法，用後妥為收拾，俾不影響下次之用；尤其使用顯微鏡之油浸鏡頭後，不可忘記擦試乾淨。 ‧ 有傳染危險之器具、培養基、污物等應依其性質分別以煮沸法、浸泡消毒法或高壓滅菌法等方法消毒，以防止病原污染及散播。 ‧ 實驗完畢後切記以消毒藥水消毒手指及實驗台。 ‧ 使用易燃性藥品及燃料，如黃磷、乙醚、酒精、瓦斯時，應小心謹慎。萬一著火，絕不可慌張，應沉著處理，乙醚、酒精類應使用泡沫劑、棉被或濕的毛巾滅火，忌用水而使火勢擴大。 ‧ 下班前應再檢查瓦斯是否已緊閉，電源開關是否已切斷，水龍頭是否已栓緊。 ‧ 實驗室內外應定期清掃，以消毒水消毒地板桌面等，以維持實驗安全。 ‧ 實驗室應嚴格管制人員之進出，尤其嚴禁推銷員等無關人員出入。記錄彙整等文書工作應另闢休息室供用。 ‧ 實驗室內物品需分門別類，儲放於固定地點，忌隨意搬移，尤不可搬出實驗室外。 ‧ 實驗室內應有小型儲貨櫥，由專人管理，定期補貨，以利研究工作之進行。 ‧ 執行重大傳染病之研究單位，應有隔離陰壓實驗室之設置，以杜絕病原污染鄰近環境之可能性 ( 請參考優良實驗規範 )。 1.2. 實驗室之設備 一個健全的研究機關至少應有一般實驗室、無菌室、生化實驗室、病理實驗室及試驗動物舍等單位之設置。 1.2. 1. 一般實驗室 通常將實驗台設於實驗室中央，台面以耐熱、耐酸及耐水之堅固材質製成。除應有水電、液化瓦斯、洗滌槽等設施外，並應用下列儀器及設備：光學顯微鏡 ( 含照相設備 )、倒立顯微鏡 ( 含照相設備 )、螢光顯微鏡 ( 含照相設備 )、低溫恆溫箱、二氧化碳恆溫箱、溫度控制恆溫箱、4℃ 冰箱、-80℃ 低溫冰櫃、-20℃ 冷凍櫃、離心機、煮沸消毒器、解剖器具、解剖台、血球計算器、計數器、PH 測定器、小型噴霧器，恆溫水槽、上皿天秤、微量天秤、試管架、計時器、真空幫浦、採材箱、細菌濾過器、迅速高壓滅菌器、乾熱滅菌器、蒸餾水製造器、電磁攪拌器、細胞培養用及細菌培養用及細菌培養用玻璃器具、藥品櫥、機械櫥、白金耳、白金線、鐵絲網籠、電動式吸管輔助器、液態氮筒、吸管洗滌器、12 爪連續稀釋器、8 爪連續分注器、無菌無塵操作台、可調式微量吸管等。 1.2. 2. 無菌室 為實施細胞、病毒或細菌培養及危險材料之專用單位。實驗室與無菌室之間應設置隔間，在隔間內換穿無菌室專用之白衣、帽子、口罩、手套及拖鞋後進入無菌室。無菌室及隔間內均應裝設紫外線殺菌燈。天花板應用耐水材質，牆壁應用白色瓷磚或其他光潔建材，地面應用磨石子或其它光潔材料，並有適當傾斜，以便沖洗消毒。為防積存塵埃，牆壁應平坦光潔。日光燈及殺菌燈不可使用懸吊式，應嵌入天花板內。為因應夏季工作需要，冷氣機之設置有其必要性。 1.2. 3. 生化實驗室 本室除應具備一般實驗室設備外，尚需增設下述儀器：煙櫃 ( 毒氣櫃 )、真空旋轉濃縮器、真空幫浦、原子吸光儀、高效能液相分析儀、分光光度儀、TLC 掃描儀、氣相層析儀、微量離心機、電泳槽、溫度循環機等。 1.2. 4. 病理實驗室 病理實驗室需有解剖房之設置，房內需有不銹鋼解剖台、解剖用具、病材保存液及櫃等，實驗室內應增設高性能解析度顯微鏡 ( 含照相設備 )、冷凍切片機、組織包埋注蠟系統、迴轉式組織切片機、自動染色機、自動組織脫水包埋機等。 1.2. 5. 試驗動物舍 應另設試驗動物舍而儘量避免將小動物飼養於實驗室內。地面應用磨石子或水泥，以便消毒沖洗，並應設置污水消毒處理槽。室內經常保持清潔，最好裝設空氣調節設備，亦應裝置排氣機。放置飼育箱用之鐵架可做成 3 段或 4 段，鐵架之 4 隻腳如能裝置小車輪則不論移動或清掃時均極方便。應裝設空氣過濾器，以防病原污染周遭環境，並保持空氣清新。 1.3. 常備消毒藥 1.3. 1. 石炭酸溶液 將固體石炭酸連瓶浸置於恆溫水槽內溶解，通常與自來水配成 3~5% 使用。石炭酸原液有腐蝕作用，應留意不可觸及皮膚及衣物。常用於噴霧消毒、橡皮與玻璃製品及金屬器具之消毒以及紗布之浸漬，而不用於塑膠器具。消毒手指時，會使皮膚粗糙麻痺，故不適於手指之消毒。 1.3. 2. 6% 次氯酸鈉水溶液 商品名為高力士，尚與自來水配成 500 倍水溶液使用。適用於吸管、玻璃器皿、動物屍體、動物舍、動物飼育箱、籠之消毒。 1.3. 3. 陽性肥皂液 常用 0.1~1.0% 水溶液。販賣品有 10%、30% 及 50% 濃度者，應依使用說明書稀釋使用。無臭，故適用於手指、雞蛋、玻璃器具及金屬器具之消毒。商品名為 Antiseptol，Hyamine 等。 1.3. 4. 酒精 以 70% 濃度之消毒力最強，純酒精之消毒力反而較弱。通常將脫脂棉切成小塊，放進有蓋標本瓶，做成酒精棉使用，用於手指之消毒及注射時之局部消毒等。 1.3. 5.碘酒 裝入小瓶，以棉棒浸潤使用，或將脫脂棉做成小圓團放入小容器內，浸漬碘酒，以竹製鑷子捏夾使用之。用於皮膚、傷口、雞蛋等之消毒，消毒力甚強，但對於局部亦有傷害，故應以酒精棉拭取過剩之碘液。 1.3. 6.3% 雙氧水及 0.1% 過錳酸鉀水溶液，均適用於口內吸入危險材料時之漱口。 1.4. 器具洗滌及滅菌 1.4. 1. 玻璃器具之洗滌法
1. 肥皂水洗滌法： 將肥皂粉溶解於溫水，把需洗滌之玻璃器具浸漬一夜，翌日使用毛刷，充分刷洗後以自來水沖洗清淨，再以蒸餾水沖洗，置乾燥架或鐵籠中自然乾燥。如需急用，可放入乾燥器內以低溫乾燥。 2. 重鉻酸鉀硫酸溶液洗滌法： 新購玻璃器具，或以肥皂水刷洗不淨時，可使用重鉻酸鉀硫酸溶液浸漬一夜後取出，先以清水沖洗，再以刷子粘附肥皂粉及灰粉充分刷洗，最後以清水及蒸餾水充分沖洗 ( 浸漬重鉻酸鉀硫酸溶液者，應特別留意充分沖洗 )。操作時應使用厚質橡皮手套，尤應小心不可噴入眼睛。 重鉻酸鉀硫酸溶液配製法： 粗製重鉻酸鉀 300 gm 20% 硫酸水溶液 3000 ml 使用琺瑯質或陶質容器，先放入 20% 硫酸水溶液，然後緩慢加入粗製重鉻酸鉀，以玻璃棒攪拌，此時會發熱，俟冷卻後使用。 3. 載玻片及蓋玻片洗滌法： 用過之載玻片以肥皂水煮沸除去載玻片之油脂，浸漬於重鉻酸鉀硫酸溶液內一夜，以自來水充分沖洗。若以面盆洗滌，應換水 5~6 次。洗滌後浸漬於 2% 鹽酸酒精內，用前放於濾紙上，以乾淨無油之紗布擦乾備用。 1.4. 2. 滅菌法
1. 乾熱滅菌法： 燒瓶及試管在其口部塞入棉栓，燒皿、乳缽、吸管及量筒則以鋁鉑紙適當包裝，貼上滅菌標籤後放入乾熱滅菌器內，加熱 160℃ 滅菌 60~90 分鐘，滅菌完成後應俟冷卻後取出。如於高溫時開門，由於急速冷卻，會引起玻璃之爆裂以及紙與棉花之燃燒，應小心留意。 2. 蒸氣滅菌法： 通常使用可沸 (Koch) 蒸氣釜，加入適量之水，放入滅菌物品，加蓋後加熱。為使蒸氣循環良好，不可同時放入太多物品。內部溫度到達 100℃ 後加熱 30~60 分鐘，滅菌完成應於尚熱時取出，拿掉玻璃紙或硫酸紙，使棉栓乾燥。有芽胞之細菌，須實施每天 100℃ 30 分鐘，連續 3 天之間歇滅菌。 3. 高壓滅菌法： 醫院、研究所等機構通常採用大型電氣迅速高壓滅菌器，極為簡便。滅菌溫度 (121℃)、壓力 (1kg/cm2) 及時間 (15~30 分鐘 ) 設定後應注意排氣孔是否完全關閉，內部水量是否足夠，檢查無誤後，方可啟動機器。滅菌完了排氣時，不可過急，應使氣壓緩慢下降或使其自然降壓後開啟，否則內容會沸騰而碰觸栓蓋，甚至因壓力過大而被沖掉。 4. 濾過滅菌法： 血清、組織培養用之 Trypsin 與培養液以及病毒乳劑等須除去細菌時應用本法。有 Berkefeld 型、chamberland 型、Seitz 型及 Millipore 型四種。Berkefeld 型濾過器是哇藻土製成者，依其孔之大小有 V(Vied)，N(Normal)、W(wenig) 等三種。W可將所有細菌完全阻止，V 可讓腸內菌通過，N 則為中間型。Chamberland 型濾過器為 Kaolin 與硅砂混合經高熱處理製成者，有 L1、L2、L3…… 等種類。L1 只使濾液透明，L3 以下則可完全阻止細菌之通過。Seitz 型濾過器使用以石綿做成之圓板 ( 通常使用直徑為 3cm、6cm、14cm 者 )。濾過板有 K 與 EK 二種，EK 可完全除去細菌。 Millipore 型濾過器之形態與使用法和 Seitz 型相同，但以 Membrane filter 代替濾板。孔徑大小有 0.22、0.3、0.45 及 0.65-5.0μ 等多種，可用於病毒大小之測定。濾過前須以鍚箔紙或玻璃紙包裝妥當，經高壓滅菌後使用，裝濾液之玻璃瓶可用乾熱滅菌之。通常使用真空幫浦，吸引成陰壓，使材料溶液通過濾過器，濾液再以 Thioglicolate 培養液查是否無菌。數量多時亦可使用空氣壓縮器以陽壓過濾。一般濾過均採較大口徑濾膜粗濾後，再行細濾，以免大顆粒物質阻塞濾孔，而使過濾效果減低。 1.5. 離心機之使用 將需離心分離之液體放入離心管內，另取同形之離心管加水，以天平稱為等重，放入離心機內對稱之位置，設定離心時間與轉速後，蓋上蓋子，啟動機器，使迴轉速緩慢上升；轉速上升太快，往往導致離心管的破損。待自然停止後，取出離心管，以吸引幫浦油抽掉上清液或以吸管吸取上清液備用。 離心機使用後應隨時擦拭機體內外，保持整潔並定期維護。設有低溫裝置者，應於使用後切斷電源，以免壓縮機持續運轉而燒壞，並打開機蓋，使水汽散失，以保持乾燥。