廿二、新城雞瘟
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(一)病名及病原
1.病名：新城雞瘟 (Newcastle disease)
2.病原：是由第一型副粘液病毒 (Paramyxovirus type-1；PMV-1) 所引起。禽類副粘液病毒共有 9 種亞型，即 PMV1-9 型。
(二)疾病簡介
本病是一種具高度傳染力及高度致病力的病毒性疾病，對雞及多種家禽或野禽都具感染力。本病係由 Doyle 在 1926 年首先在英國的新城 (Newcastle) 地方發現而命名，目前依其臨床症狀及病理變化之不同而大致分為
(1) 亞洲型 ( 急性致死型、內臟型、Doyle型 )
(2) 美國型 ( 慢性型 )，美國型又細分為強毒神經型 (Beach 型 ) 中等毒型 (Beaudette 型 )、弱毒型 (Hitchner 型 ) 及無毒腸道型，雖然其臨床表現不同，其致病病毒在形態上及抗原性上都很相近，而被認為係由同一種血清型的新城雞瘟病毒所引起的不同病型。
(三)典型之臨床症狀及病理變化
1. 臨床症狀
雞不分年齡及品種一律皆會感染。一般而言，中、小雞的感染率較高，潛伏期為 2～15 日，平均 5～6 日。本病的發生及症狀依免疫之程度、病毒之毒性及感染量、宿主之感受性或環境而有差異。
亞洲型 ( 強毒內臟型 ) 之病程甚短，一發病就開始死亡，病雞食慾廢絕，體溫上升至 42～42℃，沉鬱、嗜眠、逆毛、並排泄帶有白色的濃綠色下痢便，聚集在角落不動，眼、喉及臉部常見水腫，並由喉頭發出囉音及奇聲或開口呼吸，無法起立、厥攣，一般經 1～3 日病程後就死。小雞的頭部、翅膀、尾部會抽搐。病程較長者開始出現斜頸、歪頭及腳麻痺。急性型之死亡率 90～100%。
強毒神經型 ( 美國型 ) 經過較為慢性，大雞致死亡率約 5%，小雞之死亡率為 50～80%。主要症狀為沈鬱、呼吸症狀、下綠色便及神經症狀等，產蛋降低或停止，肉冠及肉垂呈暗紫色，中雞以下的症狀較重，中等毒型者有輕微的呼吸症狀及下痢，產蛋下降或停止，成雞的死亡極少，小雞亦即數%而已。
2. 病理變化
亞洲型的主要病變在消化道 ( 腺骨、腸管 ) 的出血、潰瘍、壞死或脾臟的白色點狀壞死等為特徵性的肉眼病變，腺骨病變易出現於食道或腺骨的移行部位較易出血，有時也會呈現全面性出血，腸管淋巴組織較發達的部位易形成出血，潰瘍或壞死病灶。消化道的病變在急性例較易見到，但病程超過 7 日以上的病例就不易觀察，脾的病變出現率亦高 ( 無脾腫 )，呈現呼吸症狀的病例可見氣管粘膜增厚、充出血及滲出液 ( 粘液 ) 的增加，又有結膜的充出血，心冠部，肋骨下或腹部脂肪組織的點狀出血，及由眼臉、顏面之腫脹，卵巢異常 ( 軟卵胞、血腫卵胞、卵胞破裂、墜卵、變形卵胞 )，共泄腔充出血或華氏囊之肥厚水腫或充出血等病變亦見於亞洲型 (VVND) 病例。
美國型的肉眼病變主要在呼吸道 ( 氣管粘液的增加、粘膜增厚、氣囊的輕度混濁、增生增厚及肺炎 ) 等病變，前述病變皆非ND的特徵性病變。
本病毒會破壞淋巴球，所以急性例在全身各淋巴組織的淋巴球會崩壞至消失，並有巨噬細胞之增殖，本變化見於脾、胸腺、華氏囊、盲腸扁桃、消化道及呼吸道之粘腊固有層、腦及脊髓的血管周圍等，又脾、胸腺及消化道的病灶伴有纖維素滲出，並在消化道形成潰瘍。在急性例的中樞神經可見血管周圍性巨噬細胞的增殖，神經細胞的壞死及小神經膠細 Microglia 反應 ( 噬神經現象，Glia 結節 )，病程較長者血管周圍的浸潤細胞由漿細胞變為淋巴球，不全壞死灶出現於大腦、中腦、視葉、延腦及小腦。
(四)應採病材
對發病初期及死後不久的雞採取實質臟器 ( 肝、肺、脾、腦 )，氣管與口腔粘液及腸內容物等。
(五)綜合診斷
野外如發生急性致死及高死亡率的疾病應先懷疑是否感染到 ND，診斷的方法須從發生狀況，症狀及病變等供為診斷之參考，亞洲型 ND 依發生狀況，症狀及病變較有特徵故易於診斷，但美國型 ND 的症狀及病變較不見特異性，所以較難診斷，應配合實驗室內檢查才能確診。目前各雞場廣用疫苗因此在診斷本病時應注意到雞群的疫苗接種情形供為參考，又不完全免疫的雞群亦難有明顯的症狀及病變。
1.病原分離及同定
病雞的病毒分離方法是用雞胚，雞腎或雞胚纖維芽細胞 (CEF) 分離病毒，對發病初期及死後不久的雞採取實質臟器 ( 肝、肺、脾、腦 ) 氣管，口腔粘液，腸內容物等，製成 10~12% 乳劑以接種於 8~10 日齡雞胚尿膜腔內或感受性細胞，接種後 24 小時以後的死亡雞蛋，採取尿液檢查紅血球凝 (HA) 性，如呈陽性時用免疫血清作 HA 抑制 (HI) 試驗或中和試驗以鑑定病毒，ND 病毒在細胞培養會形成融合性的 CPE，培養液或感染細胞均具有 HA 性，可以免疫血清鑑定病毒，如用螢光抗體法可檢出細胞中的抗原。一般以 HI 及 HA 法較常用，見附錄 1 及附錄 2。
因為 NDV 有毒力強弱之不同及活毒疫苗廣泛地被使用，所以雖然由臨床上有出現症狀的病雞所分離得的 NDV，也須要做進一步的病原性鑑定。病原性鑑定方法如：
(a)平均致死時間 (Mean death time in eggs ; MDT) 抽取新鮮感的尿囊液 (allantoic fluid) 在生理鹽水中 10 倍連續稀釋成 10-6～10-9，每一稀釋倍數接種 0.1ml 至 9~10 日齡 SPF 雞胚 5 個，放置 37℃ 孵卵器中。每一稀釋倍數接種後剩餘的病毒在 4℃，8 小時後再各接 5 個胚，同樣置 37℃ 中。每日 2 次照蛋檢查，連續 7 日，記綠雞胚死亡時間。造成接種雞胚全部死亡的最高稀釋倍數即為最小致死劑量 (the minimum lethal dose)，MDT 即為最小致死劑量殺死胚胎的平均時間。 MDT 可用於分類 NDV 為強毒株 (MDT 小於 60 小時 )，中毒株 (MDT60~90 小時 ) 及弱毒株 (MDT 大於 90 小時 )。
(b)腦內接種病原性指數 (Intracerebral pathogenicity index ; ICPI) 新鮮感染的尿囊液 HA 力價高於 16 者，以生理鹽水稀釋 10 倍，腦內接種於 1 日齡 SPF 雞 10 集，每隻 0.05ml，接種後每 24 小時觀察一次，連續觀察 8 日，正常雞記錄值為 0，病雞 1，死亡雞 2，ICPI 即為全部 8 日內每日每隻雞的平均數值，所以最強毒株的 ICPI 值幾近 2.0，而弱毒株的值則接近 0.0。
(c)靜脈內接種病原性指數 (Intravenous pathogenicity index ; IVPI) 新鮮感染的尿囊液 HA 高於 16 者，以無菌生理鹽水稀釋 10 倍，取 0.1ml 行靜脈內接種於 6 週齡 SPF 雞 10 集，連續觀察 10 日，每日記錄觀察之結果；正常雞給 0，病雞 1，麻痺癱瘓者給 2，死雞給 3 分。IVPI 即表示 10 日內每日觀察每隻雞的平均數值，弱毒株和中毒株之 ICPI 值為 0，而強毒株的 IVPI 值約 3.0。 IVPI 試驗方法稍作改變，將未稀釋的尿囊液塗拭於 8 週齡雞的泄殖腔及結膜取代靜脈內接種方法，可用以區別親內臟型強毒株和其他強毒株病毒。
(六)確診依據
亞洲型 ND 依其臨床症狀如依其發生死亡率、沈鬱、綠色下痢、呼吸器症狀 ( 開口呼吸、喉鳴音、噴嚏、喘鳴、咳嗽、奇聲 )、流涎、神經症狀 ( 痙攣、抽搐、頭頸、腳、翼的麻痺 )、肉冠、肉垂的紫紺，顏部腫脹，眼炎及產蛋低下可初步診斷，美國型 ND 依其症狀如呈沈鬱、呼吸器症狀、下痢、神經症狀、產蛋低下或停止、雞冠肉垂的紫紺等症狀，並作病理檢查其特微有 1. 消化道的出血、潰瘍及壞死，2. 呼吸器及如氣管粘膜之充出血或卡他性病變，氣囊混濁，3. 脾的點狀壞死，卵巢異常，4. 腦脊髓的非化膿性腦炎等為本病確診的依據，最後以病毒分離並依病毒的病原性指數鑑定屬為何種層次的毒株 ( 強、中、弱 )。
(七)參考文獻
1.Adair, B. M., M. S. McNulty, D. Todd, T. J. Connor, and K. Burns. Quantitative estimation of Newcastle disease virus antibody levels in chickens and turkcys by ElISA.Avian Pathol.18：175-192.1989.
2.Beard, B.W., and R.P.hansooon.Newcastle disease.In Disease of poultry, 8th ed. M. S. Hofstad, H. J. Barnes, B. W. Calnek, W. M. Reid, and H. W. Yoder, Jr., eds. Iowa State University Press, Ames, Iowa. pp.452-470.1984.
3.Hanson, R. P. Newcastle disease. In:Isolation and identificastion of avain pathogens. S. B. Hitchner, C. H. Domermuth, H. G, Purchase, AND J. E. Williams, eds. American Association of Avian Pathologists, College Station,Texas.pp.63-66-1980.
4.Rott, R., and H.-D Klenk. Molecular basis of infectivity and pathogen-icity of Newcastle disease virus. In:Newcastle disease. D. J.Alexander, ed. Kluwer Academic Publishers, Norwell, Massachusetts.PP.9-112.1988.
5.Russsel, P. H., A. C. R. Samson, and D. J. Alexander. Newcastle disease variations. In:Applied virology research Vol.II Virus variation and epidemiology.Plenum Publishing Corp.,New York. In press.
(八)附錄
附錄 1. 血球凝集試驗 (HA test)：
感染的尿囊液 0.025ml，以生理鹽水 2 倍連續稀釋，再加 0.025ml 生理鹽水至每孔後加 1%v/v 雞紅血球液 0.025ml 至每孔。振盪混合後放置 45 分鐘。有凝集現象則紅血球不會沉降到底部。讀取至完全凝集的最高病毒液稀釋倍數即為 HA 力價。
附錄 2. 血球凝集抑制試驗 (HI test)
試驗血清取 0.025ml 在生理鹽水中 2 倍連續稀釋，每孔再加入 0.025ml 的 4HAU ND 診斷抗原。經過 15-30 分鐘後，再加入 1%V/V 雞紅血球液每孔 0.025ml，輕輕混合後放置 45 分鐘。HI 力價即血清完全抑置 4HAU 抗原的最高稀釋倍數。
凝集的判定可將盤子傾斜，只有紅血球流下的速度與不加病毒液對照紅血球流下的速度一樣快者才判定為 HI 現象。