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ALD 豬瘟強毒人工感染 SPF 豬之試驗

內容
一、 病歷：
  　　5 週齡第二代 SPF 豬行肌肉接種 104.0MLD 之 ALD 株。攻毒後第八天， 試驗豬臨床上體溫呈高熱 (41.1℃)，呈明顯神經症狀（圖 1）。
   
二、 肉眼病變：
 

1.

 脾　　： 顯著梗塞病變（圖 2）。

2.

 淋巴結： 腸間淋巴周邊出血灶。

3.

 腎　臟： 腎臟密發點狀出血灶。

4.

 膀　胱： 萎縮。
   
三、 組織病變：
 
1. 中樞神經系統： 大腦、小腦及橋腦皆呈非化膿性腦膜腦炎，腦實質可見巴球圍管、血管內皮細胞增生、小神經膠細胞增生及噬神經現象等病變（圖3）。
2. 脾　臟： 局部梗塞，血管內皮細胞增生，脾小結周圍成熟淋巴球顯著減少，而改由網狀內皮細胞所取代（圖 4）。
3. 淋巴結： 成熟淋巴球顯著減少，血管內皮細胞及網狀內皮細胞顯著增生。
4. 盲　腸： 淋巴小結聚集處粘膜面，呈局部潰瘍灶。
   
四、 微生物學檢驗：
  1. 細菌檢查：
  採取病豬之肺、肝、脾、腦及膽囊等臟器於 TSA、Mac Conkey 及 DHL 培養基中培養，結果皆為陰性。
2. 血液檢查：
  (1)血球計數：白血球總數為 3250 個 /mm3。
(2)血液抹片：Wright's stain 染色檢查，白血球呈核左轉現象。
3. 病毒學檢查：
  (1) 病毒分離：試驗豬隻之各組織臟器，以含有 2％ FCS 之 EMEM 培養液做成 X10 乳劑，將乳劑及血清接種 24 孔內之 PK-CL 細胞單層，在 36℃ 3％ CO2 暖箱內吸著 2～3小時，經培養液洗滌一次後，加入內含 2％ FCS 之 EMEM 培養液。繼續培養三天後，以間接螢光（IFA）染色法判讀。
  (2) PCR 診斷：HCV 陽性（方法請參照病歷八）。
   
五、 診斷：
  豬瘟（Hog Cholera）
   
六、 討論：
 
1. 人工感染 ALD 病毒株第 8 日起，即出現可辨認之組織學上豬瘟病變，若將感染日程延至 12 日以上，則病變將更典型與明顯。
2. ALD 病毒株其毒力應較一般野外豬瘟病毒毒力來得強。李等以本省 1992-1994 年間，野外爆發豬瘟病例之兩株豬瘟病毒株 (S94-4 宜蘭株；S59 花蓮株)，分別以經口及鼻方式人工感染 48 頭 5 週齡第二代 SPF 豬，結果肉眼病變與目前本省豬瘟之野外病例類似，皆不易發現明顯之脾梗塞及淋巴結周邊出血之病變。而組織病變以淋巴系統之血管內皮細胞、網狀內皮細胞顯著增生及成熟淋巴球減少等病變較具特徵性；反之，非化膿性腦炎之病變不如其他病毒性疾病明顯，有時亦不易與敗血症型沙氏桿菌症引起之非化膿性腦炎區別之。 S94-4 病毒實驗豬，觀察至攻毒後第 13 日止，皆無明顯之臨床症狀顯現。但體溫自 5-9 PCD (day post-challenge) 止，升高至 41℃ 以上，其中尤以 PCD 7 時之 42.3℃ 為最高。S59 病毒實驗豬攻毒後至第 15 日止，臨床上皆無明顯異狀，其中選留四頭攻毒豬觀察至 PCD 36，再以 104.0 MLD 之 ALD 強毒攻擊之，至二次攻毒後 PCD 14 日止，四頭豬隻皆耐過，亦無明顯之臨床症狀顯現。熱反應情形較 S94-4 攻毒組輕微。S94-4 及 S59 兩病毒於 SPF 豬引 起之肉眼病變極輕微，臨床上皆無病徵及死亡發生，S59 攻毒豬觀察至 PCD 36 止仍無異狀，與 ALD 強毒株引起之明顯臨床症狀及病變有極大差異。48 頭試驗豬之迴盲瓣皆無鈕扣狀潰瘍病變，應與無併發二次性沙氏桿菌感染症有關。肉眼病變以脾梗塞之出現率 25％ 及 16.7％ 最高也最具特徵性。豬瘟之非化膿性腦炎之病變出現率依不同感染毒株而有所差異，據 Dunn 等報告謂 100% 、Brunschwiler 謂 39.6％、Seifled 謂 84.6％、大林稱 93.3％、石井進謂 70％。而程等報告人工感染 36 例 ALD 豬瘟病毒之瀕死豬，其非化膿性腦膜腦炎病變的出現率為 90%，其組織病理變化為淋巴球性圍管現象 (Perivascular cuffing) 、 小神經膠質細胞增殖性結節 (Microgliosis) 、圍管性出血 ( Perivascular hemorrhage)、血管內皮細胞變性及增生 (Degeneration and proliferative degeneration of endothelial cell) 等病變。本試驗兩病毒株引起之非化膿性腦炎之出現率 S94-4 為 25％、S59 為 20.83％；組織病理變化自 PCD6 起，初期可見腦血管內白血球呈著邊現象，繼而可見輕度血管炎及淋巴球性圍管現象，進而可見血管內皮細胞變性腫脹、增生及小神經膠細胞增殖性結節之出現；本試驗豬之非化膿性腦炎病變出現與體溫升高及核左轉之出現皆呈一致性，此結果與程等及 Van Oirschot 等所述同。Wood 及 Meldrum 等於臨床症狀及剖解病變極似豬瘟之病例，分離出沙氏桿菌，但豬瘟病毒分離結果卻為陰性。李等亦於豬敗血性沙氏桿菌症發現與豬瘟幾乎一 致之組織病變，包括非化膿性腦炎等病變。黃等於 11 頭實施哺乳前兔化豬瘟 疫苗免疫小豬，10 週齡時剖檢，腦組織病理切片其中 6 頭呈輕度圍管現象， 4 頭可見輕度膠質細胞增生等非化膿性腦炎病變。故今日野外豬瘟病例之診斷不能單以腦之非化膿性腦炎出現與否，作為確診之依據。

         圖1：豬瘟強毒 ALD 株攻毒後第八天，臨床上呈後軀麻痺及背毛粗剛等症狀。            圖2：豬瘟強毒 ALD 病毒株，攻毒後第八天，脾臟呈顯著之梗塞病變。

         圖3：非化膿性腦炎：腦實質可見圖淋巴球圍管，血管內皮細胞增生，小神經膠細胞增生及噬神經現象等病變           圖4：脾：局部梗塞，血管內皮細胞增生，脾小結周圍成熟淋巴球減少，改由網狀內皮細胞所取代。