飼料添加抗菌劑係為了增進動物之生長及維護健康，基於藥品維護動物及人體健康的重要性，
國外對於畜水產品中合成抗菌劑之殘留鑽研較多，至於飼料中抗菌劑之分析大部分針對個別藥物
為主。為簡化工作流程，提高工作效率，擬尋求簡易快速分析方法作為雞飼料中多種合成抗菌劑
同時檢測之用。( 1，2，3，4，5，6 )。
材料與方法
1.標準曲線之建立
(1)混合標準品原液：精取SMR 、SMT、 SDM、 SQX對照標準品 ( Sigma及關東化學產品 ) 各
50 mg各置入50 ml 褐色定量瓶，另OXA、 NAA、 FLU、PMA對照標準
品 ( Sigma及Alcor公司分贈 ) 各50 mg各置入50 ml 褐色定量瓶中，以
氰甲烷 ( E. Merck 產品 ) 溶解並稀釋至定容，再以氰甲烷10 倍稀釋成濃
度為100 μg/ml。
(2)混合標準溶液：量取標準品溶液10 ml 再以氰甲烷稀釋1/4及1/16 使濃度為25 μg/ml 及6.25
μg/ml。

2.檢體前處理：
(1) OXA、NAA、FLU及PMA檢測樣品前處理：
參考ROBERT K.等 ( 1995 )(5) 及Ishii Rie等1994(6)之方法加以改良：飼料樣品5 g置50 ml
褐色離心瓶加24 ml丙酮振盪10分鐘，經離心3000 rpm ( Kubota 5100, rotor RS-720, Japan )
2 分鐘，取上清液經濾紙過濾入梨形瓶，殘渣再以25 ml 丙酮二次萃取，合併萃取液入
梨形瓶，40℃減壓濃縮至乾，加丙酮10 ml 洗梨形瓶，並加入10 ml 正己烷 ( E. Merck
產品 ) ，30 ml 3%氯化鈉溶液，振搖10 秒，置離心瓶，3000 rpm 離心1 分鐘，棄正己
烷層，用10 ml 正己烷再去油質一次，把剩餘之液體移至250 ml 分液漏斗中，用25 ml
氯仿 ( E. Merck 產品 ) 潤濕遠心管後再加至分液漏斗中振盪1 分鐘，待分層後，取氯
仿層(下層)至另一個分液漏斗中第二次再用25 ml氯仿萃取1次，合併氯仿層，加25 ml 0.1
M 氫氧化鈉溶液，振盪1 分鐘，靜置使分層，丟棄氯仿層，再用25 ml 氯仿，小心前後
輕搖10 次，避免起泡，丟棄氯仿層，後加入25 ml 0.075 M磷酸，再加入25 ml 氯仿，
劇烈振盪1 分鐘，流出下層，通過12.5 cm 濾紙入梨形瓶，再用25 ml 氯仿再次萃取一
次，合併氯仿層液，於40℃減壓至乾，加入2 ml 氰甲烷，再減壓至乾，殘渣以1 ml 移
動相經超音波振盪溶解，經0.45 μm 濾膜 ( Nylon 材質 ) 過濾後注入HPLC 檢測。
(2)磺胺劑樣品檢測前處理：
取雞飼料樣品5 g，以25 ml 氰甲烷萃取，經離心 ( 3000 rpm， 10 分鐘 ) ，殘渣再以25 ml
氰甲烷重複一次上述步驟，合併二次氰甲烷液各入褐色色析管經(1)酸性三氧化二鋁5 g，
先以10 ml 氰甲烷活化(2)經鹼性三氧化二鋁(3)經Sep pak C18 cartrige (4)經Sep pak silica
處理後，經減壓濃縮蒸乾。殘渣以氰甲烷：0.1%磷酸 ( 4：6 ) 1 ml 經超音波振盪溶解，
經0.45 μm 之濾膜過濾後注入HPLC 檢測，以求取較好的前處理檢測方法。
3. OXA、NAA、FLU分析條件：
(1)高效液相層析分離管柱：Mightysil RP-18GP 150×4.6 mm
( 5μm ) 高純度silica gel。
(2)移動相：0.02 M Phosphoric acid – acetonitrile – tetrahydrofuran ( 72+16+12 )
(3)螢光檢測波長：激發波長325 nm，吸收波長365 nm。
(4)流速：1 ml/min
(5)注入量：10 μl
(6)高效液相層析儀： Hitachi 幫浦：L-6200 型；檢測器：L-4250 型：記錄器： D-2500型及canon
Bjc-210sp：column oven：L-7300型，檢測器Hitachi L-4250，螢光Hitachi
F-1050。

4. SMR、SMT、SDM、SQX分析條件：
(1)高效液相層析分離管柱：Mightysil RP-18GP 150×4.6 mm
( 5μm ) 高純度silica gel。
(2)移動相：25 mM NaH2PO4-CH3CN ( 80：20 )
(3)UV檢測波長：254 nm
(4)流速：1 ml/min
(5)注入量：20 μl
5.回收率試驗：
取雞飼料5 g 3 份，置50 ml 褐色離心瓶，各別加入OXA、NAA、FLU混合標準溶液 ( 100 μ
g/ml ) 1 ml， ( 25 μg/ml ) 1 ml， ( 6.25μg/ml ) 1 ml 使其為20、5、1.25 μg/g。依上述前
處理方法及分析條件測試。
雞飼料5 g 3 份，置50 ml 褐色離心瓶，各別加入SMR、SMT、SDM、SQX混合標準溶液 ( 100
μg/ml ) 1 ml， ( 25 μg/ml ) 1 ml， ( 6.25 μg/ml ) 1 ml 使其為20、5、1.25 μg/g。依前處
理方法經酸性三氧化二鋁淨化再依檢測波長254 nm，移動相25 mM NaH2PO4：CH3CN ( 80：
20 ) 測試。
結　　果
添加NAA、OXA、FLU之檢體回收率皆有96% 以上 (表1 ) ，且線性良好， [ 如圖2，R 值
接近於1 ] 。又檢體中同時檢測磺胺劑部分，以經酸性三氧化二鋁處理後的氰甲烷液經減壓濃縮蒸
乾，殘渣再以25 mM NaH2PO4：CH3CN ( 80：20 ) 1 ml 溶解注入HPLC，較無干擾波峰出現，但只出現SMT、SMR、SDM、SQX四支波峰。

討　　論
NAA、OXA、FLU、PMA，以前處理方法經濃縮蒸乾再以0.02 M 磷酸：氰甲烷：四氫夫喃 ( 72：
16：12 ) 1 ml 溶解，經HPLC 分析，於UV 280 nm 檢測，雖可同時檢出，但回收率為70.6%、99.4%、
77.6%、30.2%，且雜波峰較多，如圖1，若改以螢光檢測，激發波長325 nm，吸收波長365 nm，
則OXA、NAA、FLU 回收率皆有96% 以上，如圖2。另六種磺胺劑若以管柱溫度40℃，25 mM
NaH2PO4：CH3CN為移動相作梯度分析，標準品可得到良好結果如圖3，但添加飼料後只剩SMT、
SMR、SQX 三支波峰，且回收率也不理想 ( 約只剩1/3 左右 ) 又檢體以經酸性三氧化二鋁處理後
的氰甲烷液經減壓濃縮蒸乾，殘渣再以移動相1 ml 溶解注入HPLC，較無干擾波峰出現，但SMR
與STZ滯留時間接近，SMM 波峰變成很小支‧也曾試以5×10-3 M 醋酸：甲醇 ( 60：40 ) 為移動相，波長230 nm，樣品經前處理方法，結果SMR、SMT、SDM、SQX 滯留時間雖於10 分鐘內，但回收率只26.6%、56.9%、60.1%、46.3% ，如圖5。經試多種檢測波長（ 230 nm，254 nm，265 nm ）及多種移動相，如80% 氰甲烷：0.1% 磷酸 ( 25：75 ) 或25 mM NaH2PO4：CH3CN ( 80：20 ) 或
以25 mM NaH2PO4：CH3CN作梯度分析，及以不同條件淨化處理，結果發現添加藥品在飼料中所
呈現波峰不是雜訊多，就是空白飼料有很多波峰或是波峰沒有呈現，也有波峰滯留時間接近易干
擾如STZ與SMR，而SMM 則只呈現小波峰，回收率甚低。