由於以傳統之斜面培養基（Lowenstein-Jensen medium，L-J M）分離結核分枝桿菌至少需時5至14 週(1,6)，為縮短其分離時間，以提升診斷品質及時效，而自行研發改良以組織培養分離本菌(2,3,4,5,7,8,9,10,11,12)，以與斜面培養基分別分離本菌之結果分析比較，以供參考。今就所使用之方法、材料及結果等，分述於下。

材料與方法

　　首將本所分離所得之牛型結核分枝桿菌(Mycobacterium bovis ,M.bovis)分離株(M.bovis-YL)分別 接種於初代豬肺臟大吞噬細胞(Swine alvoelar macrophage,SAM)及株化細胞 OCC 和 Marc-145,並於接 種後後第 1 天起每天各取 3 片 Chamber slide 固定、抗酸菌染色、鏡檢至第 7 天。次將以 PPD  皮內注射測定，判定為陽性反應牛隻、鹿及羊之臟器淋巴組織，分別以  0.1％  之 次氯酸納溶液清洗後，浸置於 4℃下 12～24 小時，取出後以無菌剪刀細剪後，加入適量(3～5mL)之  Dubos’broth  後，以電動磨碎機( Grinder )磨碎後，加入 0.5N 之 NaOH 處理 30 分鐘後，再加入6N 之 HCl 處理 30 分鐘，最後以 1N 之 NaOH 加入中和處理 30 分鐘後，放入具有冷卻裝置之離心機以 3,000rpm 離心 30 分鐘後，倒棄上清液，將其沉澱物分別接種培養於  Chamber slide 內之 SAM  及 Marc-145、OCC 株化細胞和不含甘油之 L-J (w/o)M 及含 2﹪Tween 80 之 L-J (t80)M 卵培地之 Slant 斜面培養基試管後，分別放置內含 5％CO2，37℃之恆溫箱內培養，接種於上述組織培養者，如同上 述於接種後第 1 天起，每天分別各取 3 片 Chamber slide 固定、抗酸菌染色、鏡檢至第 7 天。在斜面 培養基培養方面則需 5～14 週菌落形成後，再行釣菌、固定，抗酸菌染色後鏡檢。以  Slant  斜面培 養基分離與接種於組織培養者之分離結果進行比較，以供分析、評估時之資料。