構築應用於PCR試驗之可辨識陽性對照DNA
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聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction；PCR)已普遍成為傳染性疾病診斷 實驗室的常規診斷技術，而偽陽性的檢驗結果為 PCR 診斷嚴重的問題之一。避 免偽陽性的方法，除了從試劑、設備、實驗操作區著手外，被擴增的陽性對照 核酸也可能是污染的原因之一。本實驗旨在構築應用於犬新孢子蟲 PCR 之可辨 識陽性對照 DNA，即兩端為犬新孢子蟲引子序列，中間置換成家禽流行性感冒 病毒序列。實驗步驟如下：設計犬新孢子蟲-禽流感引子對，以欲置換的禽流感 PCR 產物為模板進行 PCR，產物選殖至載體後，即建置完成可辨識陽性對照的 犬新孢子蟲質體。構築之可辨識對照犬新孢子蟲 DNA 其序列較長 211 bp，一方 面可於電泳膠片直接區別，產物也可以使用禽流感的引子再進行巢式 PCR 做為 辨識用途。另外，以相同方法完成構築牛副流行感冒病毒第三型可辨識陽性對 照之質體，再以 MEGAscript™ SP6 套組轉錄成 RNA 作為 RT-PCR 之可辨識陽性 對照。